VIGS诱导BrcuHAC1和BrcuPRMT5沉默对菜心抽薹开花时间的影响
发布时间：2021-08-11 01:01
菜心（Brassica rapa syn. campestris L. ssp. Chinensis var. utiLis Tsen et Lee）又名菜薹,是我国华南地区栽培规模最大的特产蔬菜,本研究以菜心早熟品种早熟品种“油青四九”和晚熟品种“油青甜菜心80天”为材料,克隆了菜心自主通路基因BrcuHAC1和BrcuPRMT5并且利用病毒诱导的基因沉默（VIGS）技术分析了这两个基因对菜心抽薹开花时间的影响实验方法和结果如下：1、以拟南芥AtHAC1和AtPRMT5基因的保守区域序列为模版设计引物,使用RACE技术获得菜心BrcuHACl和BrcuPRMT5基因全长。分别分析了两个基因的全长、内含子和外显子的多态性、同源性的比较以及蛋白质功能结构的分析。2、用荧光定量PCR对基因BrcuHAC1和BrcuPRMT5在菜心早熟和晚熟品种中的时间表达、空间表达进行分析。早熟和晚熟品种中的BrcuHAC1和BrcuPRMT5基因随着真叶片数量的增多表达量增强,早熟和晚熟品种中BrcuHACl和BrcuPRMT5基因的表达量在花器官中最强,茎和叶中次之,根中检测不到两个基因的表达量。3、...
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
略缩词
1. 文献综述
1.1 菜心概况
1.2 VIGS的研究进展
1.2.1 VIGS机制
1.2.2 VIGS载体的发展
1.2.3 可遗传的VIGS
1.3 十字花科植物抽薹开花分子机理研究
1.3.1 开花抑制因子FLowering Locus C(FLC)
1.3.2 开花抑制因子FLowering Locus C(FLC)的表观遗传调控研究
1.4 研究的目的意义
2 菜心组蛋白乙酰转移酶BrcuHAC1克隆、表达和功能分析
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 分析软件
2.1.3 菜心的总RNA提取
2.1.4 第一链cDNA合成
2.1.5 BrcuHAC1目的片段的获得及重组子鉴定
2.1.6 采用RACE技术扩增BrcuHAC1全长
2.1.7 BrcuHAC1的时空表达
2.1.8 菜心VIGS体系构建
2.1.9 VIGS体系中BrcuHAC1基因的检测
2.2 结果与分析
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 BrcuHAC1目的片段的获得
2.2.3 目的基因的RACE扩增和全长获得
2.2.4 BrcuHAC1基因序列及同源性分析
2.2.5 BrcuHAC1基因内含子与外显子特征分析
2.2.6 菜心组蛋白乙酰转移酶BrcuHAC1结构域的分析
2.2.7 BrcuHAC1时空表达分析
2.2.8 qRT-PCR检测菜心BrcuHAC1基因沉默效果
2.2.9 BrcuHAC1沉默对菜心抽薹开花的影响
2.3 讨论
3 菜心组蛋白甲基转移酶BrcuPRMT5克隆、表达和功能分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 分析软件
3.1.3 菜心总RNA提取
3.1.4 第一链cDNA合成
3.1.5 BrcuPRMT5目的片段的获得及重组子鉴定
3.1.6 采用RACE技术扩增BrcuPRMT5全长
3.1.7 BrcuPRMT5的时空表达
3.1.8 菜心VIGS体系构建
3.1.9 VIGS体系中BrcuPRMT5基因的检测
3.2 结果与分析
3.2.1 菜心BrcuPRMT5基因的克隆及序列分析
3.2.2 BrcuPRMT5基因的同源性比较及进化树分析
3.2.3 BrcuPRMT5基因内含子与外显子特征分析
3.2.4 菜心组蛋白精氨酸甲基转移酶BrcuPRMT5结构域的分析
3.2.5 BrcuPRMT5时空表达
3.2.6 BrcuPRMT5沉默对菜心抽薹开花的影响
3.2.7 转基因植株中BrcuPRMT5与BrcuFLC基因表达量分析
3.2.8 转基因品种的性状观察与功能分析
3.3 讨论
4、总结与展望
参考文献
附录一
附录二
致谢
本文编号：3335127
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
略缩词
1. 文献综述
1.1 菜心概况
1.2 VIGS的研究进展
1.2.1 VIGS机制
1.2.2 VIGS载体的发展
1.2.3 可遗传的VIGS
1.3 十字花科植物抽薹开花分子机理研究
1.3.1 开花抑制因子FLowering Locus C(FLC)
1.3.2 开花抑制因子FLowering Locus C(FLC)的表观遗传调控研究
1.4 研究的目的意义
2 菜心组蛋白乙酰转移酶BrcuHAC1克隆、表达和功能分析
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 分析软件
2.1.3 菜心的总RNA提取
2.1.4 第一链cDNA合成
2.1.5 BrcuHAC1目的片段的获得及重组子鉴定
2.1.6 采用RACE技术扩增BrcuHAC1全长
2.1.7 BrcuHAC1的时空表达
2.1.8 菜心VIGS体系构建
2.1.9 VIGS体系中BrcuHAC1基因的检测
2.2 结果与分析
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 BrcuHAC1目的片段的获得
2.2.3 目的基因的RACE扩增和全长获得
2.2.4 BrcuHAC1基因序列及同源性分析
2.2.5 BrcuHAC1基因内含子与外显子特征分析
2.2.6 菜心组蛋白乙酰转移酶BrcuHAC1结构域的分析
2.2.7 BrcuHAC1时空表达分析
2.2.8 qRT-PCR检测菜心BrcuHAC1基因沉默效果
2.2.9 BrcuHAC1沉默对菜心抽薹开花的影响
2.3 讨论
3 菜心组蛋白甲基转移酶BrcuPRMT5克隆、表达和功能分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 分析软件
3.1.3 菜心总RNA提取
3.1.4 第一链cDNA合成
3.1.5 BrcuPRMT5目的片段的获得及重组子鉴定
3.1.6 采用RACE技术扩增BrcuPRMT5全长
3.1.7 BrcuPRMT5的时空表达
3.1.8 菜心VIGS体系构建
3.1.9 VIGS体系中BrcuPRMT5基因的检测
3.2 结果与分析
3.2.1 菜心BrcuPRMT5基因的克隆及序列分析
3.2.2 BrcuPRMT5基因的同源性比较及进化树分析
3.2.3 BrcuPRMT5基因内含子与外显子特征分析
3.2.4 菜心组蛋白精氨酸甲基转移酶BrcuPRMT5结构域的分析
3.2.5 BrcuPRMT5时空表达
3.2.6 BrcuPRMT5沉默对菜心抽薹开花的影响
3.2.7 转基因植株中BrcuPRMT5与BrcuFLC基因表达量分析
3.2.8 转基因品种的性状观察与功能分析
3.3 讨论
4、总结与展望
参考文献
附录一
附录二
致谢
本文编号：3335127
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