中国野生毛葡萄转录因子WRKY3基因克隆与功能研究

发布时间：2021-09-02 12:37

　　葡萄作为一种重要的世界性经济果树,在国内外广泛栽培。但是具有优良品质的欧洲葡萄通常比较容易感染多种病原菌。常规杂交育种可以培育出抗病优质的葡萄新品种,但育种周期长、见效慢,而且杂交后代性状分离复杂多样。通过基因工程手段改良葡萄的抗病性逐渐受到广泛的关注和重视。WRKY转录因子是近年来新发现的转录调控因子,与低温、干旱等非生物胁迫和一些病原菌引起的生物胁迫密切相关。本研究从中国野生毛葡萄‘商-24’中克隆了抗病相关基因VqWRKY3,构建了异源表达载体转化拟南芥,并对转基因拟南芥进行抗病功能研究。取得的主要结果如下:1.采用实时荧光定量PCR技术分析了VqWRKY3在中国野生毛葡萄‘商-24’受白粉病处理后叶片中的表达情况。结果表明VqWRKY3基因可受葡萄白粉菌诱导表达上调,在处理24h基因表达量达到峰值,处理24h后表达下降。分析VqWRKY3基因在中国野生毛葡萄‘商-24’不同组织器官的表达情况。结果表明,VqWRKY3在根、茎、叶、花、卷须、果实等不同组织中均有表达,在根和卷须中的表达量较高,在花中的表达量次之,而在茎、叶和果实中的表达量较最低。2.采用同源序列法从中国野生毛葡萄... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 植物抗病机制
    1.2 植物中转录因子的研究
    1.3 WRKY转录因子研究进展
        1.3.1 WRKY转录因子概述
        1.3.2 WRKY转录因子的结构特点
        1.3.3 WRKY转录因子的分类与进化
        1.3.4 WRKY转录因子的功能
        1.3.5 WRKY转录因子在不同物种全基因组范围内的研究
    1.4 葡萄WRKY转录因子研究进展
    1.5 研究的目的和意义
第二章 VqWRKY3基因克隆及表达分析
    2.1 材料
        2.1.1 葡萄材料
        2.1.2 引物
        2.1.3 试剂、仪器设备
        2.1.4 质粒及菌种
    2.2 方法
        2.2.1 材料处理
        2.2.2 总RNA的提取及cDNA第一链的合成
        2.2.3 白粉菌处理后葡萄VqWRKY3基因的表达模式分析
        2.2.4 VqWRKY3基因克隆及测序
    2.3 结果与分析
        2.3.1 VqWRKY3在不同组织器官中的表达分析
        2.3.2 VqWRKY3在白粉菌处理后的表达模式分析
        2.3.3 VqWRKY3基因克隆与序列比对
    2.4 讨论
第三章 VqWRKY3转基因拟南芥抗病功能研究
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 病原菌
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器
        3.1.5 质粒及菌种
    3.2 方法
        3.2.1 VqWRKY3植物过量表达载体的构建
        3.2.2 GV3101农杆菌感受态细胞制备
        3.2.3 VqWRKY3植物过量表达载体电击转化农杆菌感受态GV3101
        3.2.4 菌液PCR检测
        3.2.5 农杆菌介导的拟南芥转化
        3.2.6 转基因拟南芥鉴定及株系筛选
        3.2.7 转基因拟南芥抗病性鉴定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 VqWRKY3植物过量表达载体构建
        3.3.2 转基因拟南芥阳性植株的获得及抗病株系筛选
        3.3.3 VqWRKY3转基因拟南芥对拟南芥白粉病的抗性分析
        3.3.4 VqWRKY3转基因拟南芥对PstDC3000的抗性分析
        3.3.5 VqWRKY3转基因拟南芥对灰霉病的抗性分析
        3.3.6 PAMP处理后VqWRKY3转基因拟南芥胼胝质的积累情况
    3.4 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3379023