蓝莓ZIP转运子的克隆及生物学功能研究
发布时间：2021-09-09 11:32
蓝莓（Vaccinium spp.）对土质的要求极为严格,其铁营养具有明显的低效性。为改善这一现象,生产上常采用降低土壤的pH以增加土壤中有效Fe的浓度。但与此同时,酸性土壤使根际重金属活化,易引发毒害作用。目前蓝莓中金属离子的吸收、转运等相关机理尚不明确。ZIP转运蛋白能够转运锌、Fe、锰、铜、镉、镍、砷、钴等金属元素,其在植物根系吸收金属元素、长距离运输及地上部稳态维持等发挥重要功能,但对于蓝莓中ZIP转运蛋白的研究甚少。本研究基于对蓝莓转录组数据库分析,在克隆得到蓝莓ZIP转运子家族基因cDNA全长基础上,对其进行生物信息学分析,利用酵母功能互补与异源表达实验和拟南芥遗传转化实验,对蓝莓ZIP转运蛋白的功能进行鉴定。并通过水培试验分析蓝莓在不同金属元素处理条件下的生理响应,以期揭示蓝莓ZIP转运蛋白的生物学功能,并进一步阐明蓝莓中金属元素的吸收、转运机制,有利于改善蓝莓的矿质元素吸收低效性和缓解重金属污染对蓝莓的胁迫作用。具体研究结果如下:克隆得到了6个蓝莓ZIP家族基因,将其命名为VcZIP1、VcZIP2、VcZIP6、VcZIP7、VcZIP8、VcZIP11,其序列长度为...
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转运蛋白参与金属吸收、转运、区隔示意图
A 经琼脂糖凝胶电泳得到 3 条清晰的条 rRNA 和小亚基 18S rRNA。各条带均无的质量较好。此外，RNA 的浓度在 1500 n260/OD230大于 2.0，表明该 RNA 无蛋白RNA 的纯度较高，质量较好可以用于后续莓内参基因 GAPDH 引物进行 PCR 扩增该 RNA 可作为扩增蓝莓 ZIP 家族基因的
VcZIP6（Kpn I）GGGGTACCCCATGCCGGTGTGCGCGACCGATAC（Xba I）GCTCTAGAGCTCAGGCCCAAAGGGCAAGGATAGACVcZIP7（BamH I）CGCGGATCCATGGATTCGATGGTGGTGAAGAG（Sal I）GCCGACGTCGACTCACCAGTTGAAACTAAGGGACTCAVcZIP8（Kpn I）GGGGTACCCCCGAATGGGCTCGTTAC（Xba I）GCTCTAGAGCTTAAGCCCATTTAGCTATGAGAGVcZIP11（BamH I）CGCGGATCCGCGTCTCCTTTACCTCTCCCTCC（Xba I）GCTCTAGAGCTTAAGTGTCCCAAATCATC以蓝莓叶片和根部混合 cDNA 为模板，高保真酶选择 PrimerSTAR Max DNAPolymerase，最终扩增得到 VcZIP1、VcZIP2、VcZIP6、VcZIP7、VcZIP8、VcZIP11，其序列长度分别为 1183 bp、1039 bp、1039 bp、1111 bp、1137 bp、765 bp。6 个基因电泳图如图 2.2 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]微波消解-电感耦合等离子体质谱仪法测定三七粉中重金属元素[J]. 李伟,吴英婷,郝晶晶. 分析仪器. 2019(01)
[2]ZIP蛋白在植物中的功能分析[J]. 李素贞,陈茹梅. 生物技术通报. 2018(11)
[3]水稻锌铁转运蛋白ZIP基因家族研究进展[J]. 孟璐,孙亮,谭龙涛. 遗传. 2018(01)
[4]杜梨IRT1基因的克隆及表达分析[J]. 金昕,刘娜,申长卫,谢昶琰,梅新兰,董彩霞,徐阳春. 农业生物技术学报. 2017(05)
[5]西洋菜锌铁转运蛋白NoZIP1基因的克隆及表达研究[J]. 张秋玲,卢晓丹,钟燕珊,傅明辉. 广东农业科学. 2017(02)
[6]蓝莓组织RNA提取方法的研究[J]. 余柯达,叶美娟,陈文荣,朱凯丽,张常晶,郭卫东. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2016(01)
[7]冠菌素对不同钾水平下TTC法测定的棉花根系活力的影响[J]. 张志勇,卜晶晶,王素芳,胡根海,王清连. 植物生理学报. 2015(05)
[8]利用异源酵母功能互补法研究水稻铵转运体OsAMT1;1功能及调控机制[J]. 杨顺瑛,丛郁,郝东利,苏彦华. 江苏农业科学. 2015(01)
[9]植物锌铁转运蛋白ZIP家族的生物信息学分析[J]. 傅明辉,陈肖丽. 广东农业科学. 2015(01)
[10]铁皮石斛锌铁调控转运蛋白基因的克隆与表达分析[J]. 张岗,李依民,李标,张大为,郭顺星. 中国中药杂志. 2015(01)
博士论文
[1]东南景天促生菌提高植物萃取镉效率及其机理研究[D]. 潘风山.浙江大学 2016
[2]超积累植物东南景天Cd耐性和积累的分子机制[D]. 张杰.浙江大学 2015
[3]超积累东南景天转录组学分析与ZIP家族基因功能研究[D]. 高峻.浙江大学 2013
[4]拟南芥DO12基因调节铁营养信号转导的分子机制[D]. 张霖.河南大学 2012
[5]东南景天镉超积累相关基因的克隆与功能研究[D]. 张敏.浙江大学 2011
[6]超积累东南景天（Sedum alfredii Hance）对重金属（Zn/Cd/Pb）的解毒机制[D]. 田生科.浙江大学 2010
[7]基于悬浮细胞培养的大麦耐镉性基因型差异及大小麦耐渗透胁迫差异的机理研究[D]. 董静.浙江大学 2009
[8]水稻（Oryza sativa L.）锌高效营养生理机制研究[D]. 陈文荣.浙江大学 2008
[9]两个水稻金属离子转运体基因和两个水稻锌指蛋白基因的克隆与功能研究[D]. 杨霞.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]盐渍环境下苋菜缺Ca/Fe/Zn对Cd吸收累积的影响及其与ZIP基因表达的关系[D]. 叶汉杰.暨南大学 2018
[2]铁对番茄幼苗生长的影响及其柠檬酸转运基因SlFRD3的克隆与分析[D]. 攸学松.沈阳农业大学 2017
[3]不同积累型苋菜镉吸收转运的生理机制研究[D]. 迟克宇.中国农业科学院 2016
[4]锌/镉超积累植物东南景天（Sedum alfredii Hance）两个锌转运蛋白基因的功能研究[D]. 马晓晓.浙江大学 2015
[5]缺锌胁迫下柑橘的生理变化及ZIP家族基因克隆与表达分析[D]. 邢飞.西南大学 2014
[6]蓝莓花青苷合成及对生长调节剂的响应[D]. 孙莹.北京林业大学 2013
[7]蓝莓不同构件生物量及矿质元素的季节动态[D]. 唐少勋.吉林农业大学 2012
[8]不同酸碱度对蓝莓重金属吸收的影响[D]. 郑培源.大连理工大学 2010
本文编号：3392016
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转运蛋白参与金属吸收、转运、区隔示意图
A 经琼脂糖凝胶电泳得到 3 条清晰的条 rRNA 和小亚基 18S rRNA。各条带均无的质量较好。此外，RNA 的浓度在 1500 n260/OD230大于 2.0，表明该 RNA 无蛋白RNA 的纯度较高，质量较好可以用于后续莓内参基因 GAPDH 引物进行 PCR 扩增该 RNA 可作为扩增蓝莓 ZIP 家族基因的
VcZIP6（Kpn I）GGGGTACCCCATGCCGGTGTGCGCGACCGATAC（Xba I）GCTCTAGAGCTCAGGCCCAAAGGGCAAGGATAGACVcZIP7（BamH I）CGCGGATCCATGGATTCGATGGTGGTGAAGAG（Sal I）GCCGACGTCGACTCACCAGTTGAAACTAAGGGACTCAVcZIP8（Kpn I）GGGGTACCCCCGAATGGGCTCGTTAC（Xba I）GCTCTAGAGCTTAAGCCCATTTAGCTATGAGAGVcZIP11（BamH I）CGCGGATCCGCGTCTCCTTTACCTCTCCCTCC（Xba I）GCTCTAGAGCTTAAGTGTCCCAAATCATC以蓝莓叶片和根部混合 cDNA 为模板，高保真酶选择 PrimerSTAR Max DNAPolymerase，最终扩增得到 VcZIP1、VcZIP2、VcZIP6、VcZIP7、VcZIP8、VcZIP11，其序列长度分别为 1183 bp、1039 bp、1039 bp、1111 bp、1137 bp、765 bp。6 个基因电泳图如图 2.2 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]微波消解-电感耦合等离子体质谱仪法测定三七粉中重金属元素[J]. 李伟,吴英婷,郝晶晶. 分析仪器. 2019(01)
[2]ZIP蛋白在植物中的功能分析[J]. 李素贞,陈茹梅. 生物技术通报. 2018(11)
[3]水稻锌铁转运蛋白ZIP基因家族研究进展[J]. 孟璐,孙亮,谭龙涛. 遗传. 2018(01)
[4]杜梨IRT1基因的克隆及表达分析[J]. 金昕,刘娜,申长卫,谢昶琰,梅新兰,董彩霞,徐阳春. 农业生物技术学报. 2017(05)
[5]西洋菜锌铁转运蛋白NoZIP1基因的克隆及表达研究[J]. 张秋玲,卢晓丹,钟燕珊,傅明辉. 广东农业科学. 2017(02)
[6]蓝莓组织RNA提取方法的研究[J]. 余柯达,叶美娟,陈文荣,朱凯丽,张常晶,郭卫东. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2016(01)
[7]冠菌素对不同钾水平下TTC法测定的棉花根系活力的影响[J]. 张志勇,卜晶晶,王素芳,胡根海,王清连. 植物生理学报. 2015(05)
[8]利用异源酵母功能互补法研究水稻铵转运体OsAMT1;1功能及调控机制[J]. 杨顺瑛,丛郁,郝东利,苏彦华. 江苏农业科学. 2015(01)
[9]植物锌铁转运蛋白ZIP家族的生物信息学分析[J]. 傅明辉,陈肖丽. 广东农业科学. 2015(01)
[10]铁皮石斛锌铁调控转运蛋白基因的克隆与表达分析[J]. 张岗,李依民,李标,张大为,郭顺星. 中国中药杂志. 2015(01)
博士论文
[1]东南景天促生菌提高植物萃取镉效率及其机理研究[D]. 潘风山.浙江大学 2016
[2]超积累植物东南景天Cd耐性和积累的分子机制[D]. 张杰.浙江大学 2015
[3]超积累东南景天转录组学分析与ZIP家族基因功能研究[D]. 高峻.浙江大学 2013
[4]拟南芥DO12基因调节铁营养信号转导的分子机制[D]. 张霖.河南大学 2012
[5]东南景天镉超积累相关基因的克隆与功能研究[D]. 张敏.浙江大学 2011
[6]超积累东南景天（Sedum alfredii Hance）对重金属（Zn/Cd/Pb）的解毒机制[D]. 田生科.浙江大学 2010
[7]基于悬浮细胞培养的大麦耐镉性基因型差异及大小麦耐渗透胁迫差异的机理研究[D]. 董静.浙江大学 2009
[8]水稻（Oryza sativa L.）锌高效营养生理机制研究[D]. 陈文荣.浙江大学 2008
[9]两个水稻金属离子转运体基因和两个水稻锌指蛋白基因的克隆与功能研究[D]. 杨霞.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]盐渍环境下苋菜缺Ca/Fe/Zn对Cd吸收累积的影响及其与ZIP基因表达的关系[D]. 叶汉杰.暨南大学 2018
[2]铁对番茄幼苗生长的影响及其柠檬酸转运基因SlFRD3的克隆与分析[D]. 攸学松.沈阳农业大学 2017
[3]不同积累型苋菜镉吸收转运的生理机制研究[D]. 迟克宇.中国农业科学院 2016
[4]锌/镉超积累植物东南景天（Sedum alfredii Hance）两个锌转运蛋白基因的功能研究[D]. 马晓晓.浙江大学 2015
[5]缺锌胁迫下柑橘的生理变化及ZIP家族基因克隆与表达分析[D]. 邢飞.西南大学 2014
[6]蓝莓花青苷合成及对生长调节剂的响应[D]. 孙莹.北京林业大学 2013
[7]蓝莓不同构件生物量及矿质元素的季节动态[D]. 唐少勋.吉林农业大学 2012
[8]不同酸碱度对蓝莓重金属吸收的影响[D]. 郑培源.大连理工大学 2010
本文编号：3392016
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