黄灯笼辣椒eIF4Es基因的克隆及其与PVMV-VPg互作研究
发布时间：2021-09-29 16:29
黄灯笼辣椒（Capsicum chinense）是海南省特有的辣椒品种,随着种植业的不断发展病毒病已成为海南黄灯笼辣椒减产的首要因素。甜椒脉斑驳病毒（Pepper veinal mottle virus,PVMV）属于马铃薯Y病毒属（Potyvirus）病毒,是制约海南辣椒产业发展的主要因素。Potyvirus病毒基因组5’端有1个称作VPg（virus genome linked protein）的基因组连接蛋白,在病毒侵染寄主的过程中VPg和真核翻译起始因子4E（eukaryotie translation initiation factor 4E,eIF4E）相互作用,是完成病毒侵染复制所需。本研究通过克隆黄灯笼辣椒eIF4E家族的4个基因,利用LexA-酵母双杂交体系和双分子荧光互补技术探索PVMV-VPg和黄灯笼辣椒eIF4E家族编码蛋白的相互作用,为通过eIF4E进行基因编辑,获得抗病毒育种的新材料打下基础。具体结果如下:（1）利用生物信息学技术找出eIF4E家族的所有基因,设计引物。以黄灯笼辣椒嫩叶作为实验材料提取RNA,然后用RT-PCR方法扩增4个eIF4E基因的OR...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＰＶＭＶ病毒主要症状??Ｆｉｇ．ｌ?ｔｈｅ?ｍａｉｎ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?Ｐｅｐｐｅｒ?ｖｅｉｎａｌ?ｍｏｔｔｌｅ?ｖｉｒｕｓ?ｉｎ?Ｈａｉｎａｎ??
其基因组为一条正义单链?ＲＮＡ?（ｓｉｎｇｌｅ?ｓｔｒａｎｄ?ＲＮＡ?ｏｆ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｓｅｎｓｅ，＋ｓｓＲＮＡ），??大小约为９．８?ｋｂ，可以编码通过自身裂解方式成为多个己成熟的蛋白的多聚蛋白。马??铃薯Ｙ病毒属病毒基因组结构如图２所示，各基因编码蛋白如表１。ＰＶＭＶ的全基因??组序列包含９７９３ｎｔ，３＇端具有ｐｏｌｙ（Ａ）尾结构，５＇端共价结合ＶＰｇ蛋白（＼％１１５。１＂（＾１１－??ｌｉｎｋｅｄ?ｇｅｎｏｍｉｃ）?（Ａｎｄｒｅｗ?ＭＱＫ．，２０１２；?Ｇｏ?ｒｓａｎｅＦ．，２００１；?Ｚｈａｎｇ?Ｓｅｔ?ａｌ．，?２０１５）。??ＰＶＭＶ与其它的马铃薯Ｙ病毒属家族一样，会在侵染的寄主细胞质内形成车轮状的??病毒粒子包涵体结构或者核内涵体（Ｇｉｂｂｓ?Ａ?ｅｔａｌ．，２０１０）。??ｒ？?－ＵＴＲ?「＇Ｉ?ＨＣ－Ｐｒｏ?Ｐ３?Ｃｌ?ＶＰｇ?Ｎｌａ?Ｎｂ?ＣＰ?３．－ＬＴＲ??■一一《丄?１?ＩＩ?１１?Ｉ?Ｉ?１?－?Ｐ〇＾（Ａ）??＂＊〇?〇＞?Ｏｉ??３?５?Ｓ??图２马铃薯Ｙ病毒属基因组结构??Ｆｉｇ２．Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｕｓ?Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ??表１马铃薯Ｙ病毒属病毒所编码蛋白的功能（Ｕｒｃｕｑｕｉ－Ｉｎｃｈｉｍａｅｔａｌ．，２００１；李向东等，２００６）??Ｔａｂｌｅｌ．?Ｔｈｅ?ｆｕｎｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｎｃｏｄｅｄ?ｂｙ?Ｐｏｔｊ＾ｉｒｕｓ．??蛋白质??Ｔｉ?蛋白酶活性，病毒复制，移动，寄主症状表达，干扰寄主防御方应??ＨＣ－Ｐｒｏ?蛋白酶活性，复制，蚜传，移动，沉默抑制子，寄主症状显示??Ｐ３?复制
图３?ｅＥＦ４Ｅ家庭成员的进化（Ｊｏｓｈｉ?Ｂ?ｅｔ?ａｌ．，２００５）??Ｆｉｇ．３?Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅＩＦ４Ｅ?ｆａｍｉｌｙ?ｍｅｍｂｅｒｓ?（Ｊｏｓｈｉ?Ｂ?ｅｔ?ａｌ．，?２００５）??１．３．２?ｅＩＦ４Ｅ参与真核生物蛋白质翻译的起始??ｅＩＦ４Ｅ能够和侵染寄主的病毒的５’端帽子结构的特异位点交叉结合从而启动??
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物CRISPR/Cas9基因组编辑系统与突变分析[J]. 马兴亮,刘耀光. 遗传. 2016(02)
[2]甜椒脉斑驳病毒（PVMV）在海南的发现与检测[J]. 梁洁,王健华,章绍延,余乃通,张雨良,王祥,刘志昕. 热带作物学报. 2015(05)
[3]小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白Fibrillarin互作区域[J]. 边靓,向荣,孙丽英,陈剑平. 浙江农业学报. 2014(01)
[4]双分子荧光互补技术（BiFC）分析玉米SSⅠ与PPDK1之间的蛋白互作[J]. 崔喜艳,张继晓,窦瑶,孙小杰,尹悦佳,刘相国. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(07)
[5]双分子荧光互补技术及其在植物病毒学研究中的应用[J]. 郑红英,燕飞,侯明生,陈剑平. 病毒学报. 2009(04)
[6]双分子荧光互补技术[J]. 樊晋宇,崔宗强,张先恩. 中国生物化学与分子生物学报. 2008(08)
[7]真核翻译起始因子4E[J]. 郑志芳,朱世泽. 医学分子生物学杂志. 2008(02)
[8]马铃薯Y病毒属病毒基因功能研究进展[J]. 李向东,于晓庆,古勤生,刘金亮,竺晓平,郭兴启. 山东科学. 2006(03)
[9]3种辣椒新病毒的发生与血清学鉴定[J]. 冯兰香,张宝玺,谢丙炎,王立浩,杨宇红,毛胜利. 中国蔬菜. 2005(12)
[10]无抗性标记基因转基因植物研究进展[J]. 张余洋,欧阳波,叶志彪. 农业生物技术学报. 2004(05)
博士论文
[1]辣椒病毒病研究[D]. 张竹青.湖南农业大学 2009
硕士论文
[1]香蕉束顶病毒（BBTV）NSP与其它组份编码蛋白互作研究[D]. 王祥.海南大学 2015
[2]番木瓜eIF4E和eIFiso4E的克隆及其与PRSV-VPg互作研究[D]. 吴金燕.海南大学 2010
本文编号：3414048
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＰＶＭＶ病毒主要症状??Ｆｉｇ．ｌ?ｔｈｅ?ｍａｉｎ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?Ｐｅｐｐｅｒ?ｖｅｉｎａｌ?ｍｏｔｔｌｅ?ｖｉｒｕｓ?ｉｎ?Ｈａｉｎａｎ??
其基因组为一条正义单链?ＲＮＡ?（ｓｉｎｇｌｅ?ｓｔｒａｎｄ?ＲＮＡ?ｏｆ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｓｅｎｓｅ，＋ｓｓＲＮＡ），??大小约为９．８?ｋｂ，可以编码通过自身裂解方式成为多个己成熟的蛋白的多聚蛋白。马??铃薯Ｙ病毒属病毒基因组结构如图２所示，各基因编码蛋白如表１。ＰＶＭＶ的全基因??组序列包含９７９３ｎｔ，３＇端具有ｐｏｌｙ（Ａ）尾结构，５＇端共价结合ＶＰｇ蛋白（＼％１１５。１＂（＾１１－??ｌｉｎｋｅｄ?ｇｅｎｏｍｉｃ）?（Ａｎｄｒｅｗ?ＭＱＫ．，２０１２；?Ｇｏ?ｒｓａｎｅＦ．，２００１；?Ｚｈａｎｇ?Ｓｅｔ?ａｌ．，?２０１５）。??ＰＶＭＶ与其它的马铃薯Ｙ病毒属家族一样，会在侵染的寄主细胞质内形成车轮状的??病毒粒子包涵体结构或者核内涵体（Ｇｉｂｂｓ?Ａ?ｅｔａｌ．，２０１０）。??ｒ？?－ＵＴＲ?「＇Ｉ?ＨＣ－Ｐｒｏ?Ｐ３?Ｃｌ?ＶＰｇ?Ｎｌａ?Ｎｂ?ＣＰ?３．－ＬＴＲ??■一一《丄?１?ＩＩ?１１?Ｉ?Ｉ?１?－?Ｐ〇＾（Ａ）??＂＊〇?〇＞?Ｏｉ??３?５?Ｓ??图２马铃薯Ｙ病毒属基因组结构??Ｆｉｇ２．Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｕｓ?Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ??表１马铃薯Ｙ病毒属病毒所编码蛋白的功能（Ｕｒｃｕｑｕｉ－Ｉｎｃｈｉｍａｅｔａｌ．，２００１；李向东等，２００６）??Ｔａｂｌｅｌ．?Ｔｈｅ?ｆｕｎｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｎｃｏｄｅｄ?ｂｙ?Ｐｏｔｊ＾ｉｒｕｓ．??蛋白质??Ｔｉ?蛋白酶活性，病毒复制，移动，寄主症状表达，干扰寄主防御方应??ＨＣ－Ｐｒｏ?蛋白酶活性，复制，蚜传，移动，沉默抑制子，寄主症状显示??Ｐ３?复制
图３?ｅＥＦ４Ｅ家庭成员的进化（Ｊｏｓｈｉ?Ｂ?ｅｔ?ａｌ．，２００５）??Ｆｉｇ．３?Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅＩＦ４Ｅ?ｆａｍｉｌｙ?ｍｅｍｂｅｒｓ?（Ｊｏｓｈｉ?Ｂ?ｅｔ?ａｌ．，?２００５）??１．３．２?ｅＩＦ４Ｅ参与真核生物蛋白质翻译的起始??ｅＩＦ４Ｅ能够和侵染寄主的病毒的５’端帽子结构的特异位点交叉结合从而启动??
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物CRISPR/Cas9基因组编辑系统与突变分析[J]. 马兴亮,刘耀光. 遗传. 2016(02)
[2]甜椒脉斑驳病毒（PVMV）在海南的发现与检测[J]. 梁洁,王健华,章绍延,余乃通,张雨良,王祥,刘志昕. 热带作物学报. 2015(05)
[3]小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白Fibrillarin互作区域[J]. 边靓,向荣,孙丽英,陈剑平. 浙江农业学报. 2014(01)
[4]双分子荧光互补技术（BiFC）分析玉米SSⅠ与PPDK1之间的蛋白互作[J]. 崔喜艳,张继晓,窦瑶,孙小杰,尹悦佳,刘相国. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(07)
[5]双分子荧光互补技术及其在植物病毒学研究中的应用[J]. 郑红英,燕飞,侯明生,陈剑平. 病毒学报. 2009(04)
[6]双分子荧光互补技术[J]. 樊晋宇,崔宗强,张先恩. 中国生物化学与分子生物学报. 2008(08)
[7]真核翻译起始因子4E[J]. 郑志芳,朱世泽. 医学分子生物学杂志. 2008(02)
[8]马铃薯Y病毒属病毒基因功能研究进展[J]. 李向东,于晓庆,古勤生,刘金亮,竺晓平,郭兴启. 山东科学. 2006(03)
[9]3种辣椒新病毒的发生与血清学鉴定[J]. 冯兰香,张宝玺,谢丙炎,王立浩,杨宇红,毛胜利. 中国蔬菜. 2005(12)
[10]无抗性标记基因转基因植物研究进展[J]. 张余洋,欧阳波,叶志彪. 农业生物技术学报. 2004(05)
博士论文
[1]辣椒病毒病研究[D]. 张竹青.湖南农业大学 2009
硕士论文
[1]香蕉束顶病毒（BBTV）NSP与其它组份编码蛋白互作研究[D]. 王祥.海南大学 2015
[2]番木瓜eIF4E和eIFiso4E的克隆及其与PRSV-VPg互作研究[D]. 吴金燕.海南大学 2010
本文编号：3414048
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3414048.html
