调控内源生长激素提高柑橘再生及遗传转化效率的研究
发布时间：2021-10-25 00:44
柑橘在世界范围内广泛种植,各种生物及非生物胁迫对柑橘生长发育产生不良影响从而降低果实品质和产量。由于其多胚、高度杂合、童期长以及自交不亲和等生物性状,使常规育种方法受到限制,而转基因技术由于其目的基因来源广、转化系统不受基因型控制、能够定向改良植物目的性状等优点而成为是目前柑橘育种最有效的工具。高效遗传转化体系是转基因技术应用的前提,虽已有研究者构建了有效的柑橘转化体系,但大部分柑橘种类或品种转基因效率依然很低,尤其是以成年态材料为外植体的遗传转化效率,因而柑橘遗传转化效率亟待提高。本研究以卡里佐枳橙和尤力克柠檬为材料研究了生长素极性运输与茎段上下端芽再生差异的联系及生长素在柑橘再生和遗传转化中的关键作用,并通过调控内源与外源的生长素浓度提高外植体的再生效率及转基因效率;同时以凤梨甜橙、哈姆林甜橙、埃及糖橙、伏令夏橙、卡里佐枳橙以及尤力克柠檬上胚轴节间茎段为外植体,研究利用KN1基因和IPT基因促进柑橘内源细胞分裂素的合成提高实生态柑橘遗传转化效率;另外,以成年态凤梨甜橙、伏令夏橙和华盛顿脐橙为研究材料,研究利用KN1和IPT基因提高成年态柑橘转基因效率,并通过生长素抑制剂以及甲基化抑...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
外植体采用不同切法时不定芽的再生情况
图 2-3 外植体在不同培养基中不定芽的再生情况A：外植体培养于 MS培养基，B：外植体培养于 MS + 3 mg/L 6-BA培养基Fig. 2-3 Shoots regeneration from explants with different medium.A: Explants culture in MS medium, B: Explants culture in MS + 3 mg/L 6-BAmedium2.2.2 生长素在外植上的分布情况为了便于观察生长素在上胚轴节间茎段外植体上的分布情况，用 pBin19-DR5::uidA 表达载体转化卡里佐枳橙获得转基因植株。由于 DR5 启动子受生长素高度诱导，经转化后的抗性芽叶片在添加有或不添加 10-5M NAA的 10 mM 磷酸钾缓冲液（pH 6，添加 150 mg /L Tim）中处理后，经 NAA 处理后 GUS 活性显著增强的抗性芽即可判定为转基因植株并用作后续试验。转 DR5::uidA 基因经诱导生根或试管嫁接进行扩繁。转基因植株节间茎段切下进行 GUS 染色后，通过 uidA 表达量高低即可判断生长素在外植体上的分布情况。转 DR5::uidA 植株的茎段切下后分别放在添加 20 mg/LNPA（1-N-Naphthylphthalamic acid，一种生长素极性运输抑制剂）和不添加 NPA 的
第二章 内源生长素在柑橘再生过程中的关键作用研究BCADE F得形态学上端生长素浓度降低并在形态学下端累积。而当茎段经 NPA 处理后，GUS活性在茎段上下端均可被检测到（图 2-4C），并且上下端分布较均匀 。而当茎段在MS培养基上培养 15 h 后，再用 NPA处理 15 h，最后 GUS染色结果表明 NPA本身并不具有诱导 DR5 的作用，说明图 2-4C 中的现象确实是由于生长素的极性运输被抑制而产生的。
【参考文献】：
期刊论文
[1]提高埃及糖橙遗传转化效率的研究[J]. 胡威,杨莉,谢玉明,周潇,葛红娟,李大志,邓子牛. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2013(04)
[2]植物转基因技术的诞生和发展[J]. 杨长青,王凌健,毛颖波,陈晓亚. 生命科学. 2011(02)
[3]小油桐外植体的KN1基因遗传转化及其超量表达的转基因植株[J]. 裴红杰,赵德刚,宋宝安. 基因组学与应用生物学. 2010(03)
[4]拟南芥PIN2介导的生长素极性运输调控植物根向地性[J]. 潘建伟,叶晓帆,王超,涂世伟. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2010(01)
[5]冰糖橙成年态节间茎段遗传转化体系的建立[J]. 杨莉,张家银,谢玉明,杨迎花,李琳洁,覃磊,邓子牛. 经济林研究. 2009(03)
[6]PIN蛋白在生长素极性运输中的作用[J]. 于胜楠,崔继哲. 生物技术通报. 2009(03)
[7]纽荷尔脐橙成年态节间茎段遗传转化研究[J]. 谢玉明,郭琛,张家银,杨丽,胡春华,邓子牛. 分子植物育种. 2008(05)
[8]椪柑成年态节间茎段再生体系的建立[J]. 张家银,郭琛,谢玉明,杨莉,邓子牛. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2008(02)
[9]高效的‘大红’甜橙实生苗上胚轴离体培养与植株再生体系的建立[J]. 敖小平,熊兴耀,胡新喜,冯鹄峻,邓子牛. 植物生理学通讯. 2007(04)
[10]农杆菌介导甜橙遗传转化的初步研究[J]. 谢玉明,邓子牛,郭琛,焦徕,胡春华,熊兴耀. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2005(06)
博士论文
[1]甜橙和金柑高效安全转基因技术研究[D]. 杨莉.湖南农业大学 2012
本文编号：3456317
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
外植体采用不同切法时不定芽的再生情况
图 2-3 外植体在不同培养基中不定芽的再生情况A：外植体培养于 MS培养基，B：外植体培养于 MS + 3 mg/L 6-BA培养基Fig. 2-3 Shoots regeneration from explants with different medium.A: Explants culture in MS medium, B: Explants culture in MS + 3 mg/L 6-BAmedium2.2.2 生长素在外植上的分布情况为了便于观察生长素在上胚轴节间茎段外植体上的分布情况，用 pBin19-DR5::uidA 表达载体转化卡里佐枳橙获得转基因植株。由于 DR5 启动子受生长素高度诱导，经转化后的抗性芽叶片在添加有或不添加 10-5M NAA的 10 mM 磷酸钾缓冲液（pH 6，添加 150 mg /L Tim）中处理后，经 NAA 处理后 GUS 活性显著增强的抗性芽即可判定为转基因植株并用作后续试验。转 DR5::uidA 基因经诱导生根或试管嫁接进行扩繁。转基因植株节间茎段切下进行 GUS 染色后，通过 uidA 表达量高低即可判断生长素在外植体上的分布情况。转 DR5::uidA 植株的茎段切下后分别放在添加 20 mg/LNPA（1-N-Naphthylphthalamic acid，一种生长素极性运输抑制剂）和不添加 NPA 的
第二章 内源生长素在柑橘再生过程中的关键作用研究BCADE F得形态学上端生长素浓度降低并在形态学下端累积。而当茎段经 NPA 处理后，GUS活性在茎段上下端均可被检测到（图 2-4C），并且上下端分布较均匀 。而当茎段在MS培养基上培养 15 h 后，再用 NPA处理 15 h，最后 GUS染色结果表明 NPA本身并不具有诱导 DR5 的作用，说明图 2-4C 中的现象确实是由于生长素的极性运输被抑制而产生的。
【参考文献】：
期刊论文
[1]提高埃及糖橙遗传转化效率的研究[J]. 胡威,杨莉,谢玉明,周潇,葛红娟,李大志,邓子牛. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2013(04)
[2]植物转基因技术的诞生和发展[J]. 杨长青,王凌健,毛颖波,陈晓亚. 生命科学. 2011(02)
[3]小油桐外植体的KN1基因遗传转化及其超量表达的转基因植株[J]. 裴红杰,赵德刚,宋宝安. 基因组学与应用生物学. 2010(03)
[4]拟南芥PIN2介导的生长素极性运输调控植物根向地性[J]. 潘建伟,叶晓帆,王超,涂世伟. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2010(01)
[5]冰糖橙成年态节间茎段遗传转化体系的建立[J]. 杨莉,张家银,谢玉明,杨迎花,李琳洁,覃磊,邓子牛. 经济林研究. 2009(03)
[6]PIN蛋白在生长素极性运输中的作用[J]. 于胜楠,崔继哲. 生物技术通报. 2009(03)
[7]纽荷尔脐橙成年态节间茎段遗传转化研究[J]. 谢玉明,郭琛,张家银,杨丽,胡春华,邓子牛. 分子植物育种. 2008(05)
[8]椪柑成年态节间茎段再生体系的建立[J]. 张家银,郭琛,谢玉明,杨莉,邓子牛. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2008(02)
[9]高效的‘大红’甜橙实生苗上胚轴离体培养与植株再生体系的建立[J]. 敖小平,熊兴耀,胡新喜,冯鹄峻,邓子牛. 植物生理学通讯. 2007(04)
[10]农杆菌介导甜橙遗传转化的初步研究[J]. 谢玉明,邓子牛,郭琛,焦徕,胡春华,熊兴耀. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2005(06)
博士论文
[1]甜橙和金柑高效安全转基因技术研究[D]. 杨莉.湖南农业大学 2012
本文编号：3456317
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