SlMYB64参与番茄植株生长及花粉萌发的初步研究
发布时间：2021-10-26 13:43
番茄（Solanum lycopersicum L.）是目前世界上栽培最广泛的蔬菜之一,因其风味独特、营养丰富而深受人们喜爱。花粉发育对于开花植物的有性繁殖来说至关重要。花粉的萌发和花粉管的伸长是植物完成双受精的前提。MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,广泛参与了植物的生长发育、非生物胁迫应答、激素调控以及次生代谢物质的合成等。但在番茄中MYB转录因子是否参与调控花粉发育还不清楚。之前的研究报道,番茄R2R3-MYB转录因子SlMYB64响应低温、盐等非生物胁迫。为进一步研究该基因的生物学功能,通过农杆菌介导法将该基因成功转入番茄矮生品种Micro-Tom中,得到7个T1代过表达转基因株系,但没有得到可育的种子。通过比较野生型和过表达株系的花粉活力、花粉萌发率及花粉粒外部形态,发现过表达SlMYB64显著降低了花粉的活力和花粉萌发率;而且转基因株系的花粉萌发孔发育不正常。为了得到可稳定遗传的转基因株系,又将其转入另一番茄材料“黄果自交系”中,获得17个T1代转基因株系。选取了3个表达水平不同的T2代转基因株系并对其进行了花粉育性分析。利用亚历山大染色法对花粉活力进行检测发现:...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物MYB转录因子分类H：表示螺旋；T：表示转角；W：表示色氨酸；X：表示任意氨基酸
其中本实验利用基因过表达技术研究R2R3-MYB转录因子SlMYB64在番茄中的功能，基因的过表达技术利用pBI121双元表达载体，本实验用的实验室改造后的pBI121表达载体，其中把GUS基因去掉，然后人为的在此位置加了9个多克隆酶切位点如（图2）。图 2 插入pBI121载体中的酶切位点片段Fig. 2 The segment of restriction enzyme cutting site which was inserted in the pBI121番茄基因组测序的完成及转基因体系的成熟，为利用反向遗传学技术研究番茄基因的功能奠定了基础。利用反向遗传学研究R2R3-MYB转录因子SlMYB64在番茄中的功能，以确定SlMYB64在花粉发育过程中的所起到的作用。
镀一层金属膜。3 结果与分析3.1 表达载体的构建及遗传转化3.1.1 番茄 SlMYB64 过表达载体的构建将带BamHI 与 SalI酶切位点的引物所克隆出的目的基因SlMYB64 的 CDS全长连接到 pEASY 克隆载体上，进行转化、筛选阳性克隆、摇菌、测序、质粒提取、选择测序正确的质粒用BamHI和 SalI两限制性内切酶分别酶切带目的基因片段的pEASY载体和改造后的 pBI121 表达载体。跑电泳，胶回收，回收产物并连接、转化、选取阳性克隆、质粒提取，然后用 BamHI 与 SalI 两限制性内切酶进行酶切，酶切正确后电转农杆菌，选取阳性单克隆，用 35S 序列和基因自身序列作为上下游引物进行农杆菌菌落 PCR 验证，结果如下。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大豆GmGBP1基因对转基因烟草幼苗耐热性的影响[J]. 聂腾坤,赵琳,李文滨,丁福全,李敏敏,杨雪,张可欣,孙晶哲,杜海龙. 农业生物技术学报. 2016(03)
[2]Cotton GhMYB7 is predominantly expressed in developing fibers and regulates secondary cell wall biosynthesis in transgenic Arabidopsis[J]. Junfeng Huang,Feng Chen,Siyu Wu,Juan Li,Wenliang Xu. Science China（Life Sciences）. 2016(02)
[3]棉花干旱诱导MYB类转录因子GhRAX3的功能分析[J]. 丁震乾,陈天子,刘廷利,刘小双,张保龙,周兴根. 中国农业科学. 2015(18)
[4]苹果转CpTI基因株系花粉特性研究[J]. 师校欣,周瑞金,王倩倩,常腾飞,冯莎莎,杜国强. 园艺学报. 2015(01)
[5]葡萄中盐诱导的R2R3-MYB基因的筛选与表达分析[J]. 王春荣,王庆杰,李晓玲,姚玉新,郝玉金. 园艺学报. 2014(03)
[6]植物MYB转录因子研究[J]. 刘守梅,孙玉强,王慧中. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2012(02)
[7]Identification of gamyb-4 and Analysis of the Regulatory Role of GAMYB in Rice Anther Development[J]. Zhenhua Liu1,2,Wenjie Bao2,Wanqi Liang2,Jingyuan Yin1 and Dabing Zhang2 1School of Life Sciences,Shanghai University,Shanghai 200240,China 2School of Life Science and Biotechnology,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China. Journal of Integrative Plant Biology. 2010(07)
[8]植物Myb转录因子的研究进展[J]. 陈清,汤浩茹,董晓莉,侯艳霞,罗娅,蒋艳,黄琼瑶. 基因组学与应用生物学. 2009(02)
[9]Characterization of Arabidopsis MYB transcription factor gene AtMYB17 and its possible regulation by LEAFY and AGL15[J]. Yunfei Zhang, Guangyu Cao, Li-Jia Qu, Hongya Gu National Laboratory of Protein Engineering and Plant Genetic Engineering, College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China. 遗传学报. 2009(02)
[10]Transgenic expression of MYB15 confers enhanced sensitivity to abscisic acid and improved drought tolerance in Arabidopsis thaliana[J]. Zhenhua Ding a, b, Shiming Li a, b, Xueli An a, Xin Liu a, Huanju Qin a, Daowen Wang a, a State Key Laboratory of Plant Cell and Chromosome Engineering, Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China b Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China. 遗传学报. 2009(01)
博士论文
[1]小麦MYB转录因子的功能研究[D]. 张立超.中国农业科学院 2013
本文编号：3459608
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物MYB转录因子分类H：表示螺旋；T：表示转角；W：表示色氨酸；X：表示任意氨基酸
其中本实验利用基因过表达技术研究R2R3-MYB转录因子SlMYB64在番茄中的功能，基因的过表达技术利用pBI121双元表达载体，本实验用的实验室改造后的pBI121表达载体，其中把GUS基因去掉，然后人为的在此位置加了9个多克隆酶切位点如（图2）。图 2 插入pBI121载体中的酶切位点片段Fig. 2 The segment of restriction enzyme cutting site which was inserted in the pBI121番茄基因组测序的完成及转基因体系的成熟，为利用反向遗传学技术研究番茄基因的功能奠定了基础。利用反向遗传学研究R2R3-MYB转录因子SlMYB64在番茄中的功能，以确定SlMYB64在花粉发育过程中的所起到的作用。
镀一层金属膜。3 结果与分析3.1 表达载体的构建及遗传转化3.1.1 番茄 SlMYB64 过表达载体的构建将带BamHI 与 SalI酶切位点的引物所克隆出的目的基因SlMYB64 的 CDS全长连接到 pEASY 克隆载体上，进行转化、筛选阳性克隆、摇菌、测序、质粒提取、选择测序正确的质粒用BamHI和 SalI两限制性内切酶分别酶切带目的基因片段的pEASY载体和改造后的 pBI121 表达载体。跑电泳，胶回收，回收产物并连接、转化、选取阳性克隆、质粒提取，然后用 BamHI 与 SalI 两限制性内切酶进行酶切，酶切正确后电转农杆菌，选取阳性单克隆，用 35S 序列和基因自身序列作为上下游引物进行农杆菌菌落 PCR 验证，结果如下。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大豆GmGBP1基因对转基因烟草幼苗耐热性的影响[J]. 聂腾坤,赵琳,李文滨,丁福全,李敏敏,杨雪,张可欣,孙晶哲,杜海龙. 农业生物技术学报. 2016(03)
[2]Cotton GhMYB7 is predominantly expressed in developing fibers and regulates secondary cell wall biosynthesis in transgenic Arabidopsis[J]. Junfeng Huang,Feng Chen,Siyu Wu,Juan Li,Wenliang Xu. Science China（Life Sciences）. 2016(02)
[3]棉花干旱诱导MYB类转录因子GhRAX3的功能分析[J]. 丁震乾,陈天子,刘廷利,刘小双,张保龙,周兴根. 中国农业科学. 2015(18)
[4]苹果转CpTI基因株系花粉特性研究[J]. 师校欣,周瑞金,王倩倩,常腾飞,冯莎莎,杜国强. 园艺学报. 2015(01)
[5]葡萄中盐诱导的R2R3-MYB基因的筛选与表达分析[J]. 王春荣,王庆杰,李晓玲,姚玉新,郝玉金. 园艺学报. 2014(03)
[6]植物MYB转录因子研究[J]. 刘守梅,孙玉强,王慧中. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2012(02)
[7]Identification of gamyb-4 and Analysis of the Regulatory Role of GAMYB in Rice Anther Development[J]. Zhenhua Liu1,2,Wenjie Bao2,Wanqi Liang2,Jingyuan Yin1 and Dabing Zhang2 1School of Life Sciences,Shanghai University,Shanghai 200240,China 2School of Life Science and Biotechnology,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China. Journal of Integrative Plant Biology. 2010(07)
[8]植物Myb转录因子的研究进展[J]. 陈清,汤浩茹,董晓莉,侯艳霞,罗娅,蒋艳,黄琼瑶. 基因组学与应用生物学. 2009(02)
[9]Characterization of Arabidopsis MYB transcription factor gene AtMYB17 and its possible regulation by LEAFY and AGL15[J]. Yunfei Zhang, Guangyu Cao, Li-Jia Qu, Hongya Gu National Laboratory of Protein Engineering and Plant Genetic Engineering, College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China. 遗传学报. 2009(02)
[10]Transgenic expression of MYB15 confers enhanced sensitivity to abscisic acid and improved drought tolerance in Arabidopsis thaliana[J]. Zhenhua Ding a, b, Shiming Li a, b, Xueli An a, Xin Liu a, Huanju Qin a, Daowen Wang a, a State Key Laboratory of Plant Cell and Chromosome Engineering, Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China b Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China. 遗传学报. 2009(01)
博士论文
[1]小麦MYB转录因子的功能研究[D]. 张立超.中国农业科学院 2013
本文编号：3459608
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