萝卜离体再生影响因素初步研究
发布时间：2021-10-30 13:18
萝卜（Raphanus sativus L.,2n=2x=18）,是十字花科萝卜属一、二年生草本植物,以膨大的肉质根为食用器官,营养丰富。萝卜离体再生培养技术是种质创新和遗传转化的一种重要手段,可以在短时间内培养大量与供体相同的植株,获得符合预期性状的个体。研究表明,萝卜是一种再生执拗型植物,但在十字花科的其他植物中,也有部分能建立高效的离体再生体系。但目前萝卜的离体再生体系尚不完善,实际应用中还存在较多的问题,如基因型影响、激素浓度选择和配比、外源添加剂应用等。本研究以合适的种子消毒方法为前提,从基因型、激素浓度配比、外植体类型和外源添加物筛选四个方面,研究了萝卜不定芽再生影响因素;探索了培养基中NAA浓度对再生芽生根的影响;测定了 ’XBC’下胚轴离体脱分化形成愈伤过程中抗氧化酶活性和可溶性蛋白含量的变化,旨在为构建萝卜离体再生体系和遗传转化奠定基础。主要结果如下:1.通过研究萝卜3种基因型离体再生的影响因素实验,发现基因型会影响愈伤组织形成率、褐变率和不定芽再生率。三种外植体类型切段（下胚轴、带柄子叶和叶柄）脱分化形成愈伤组织较容易,三者的愈伤诱导率均高于80%,但形成不定芽较困...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１消毒试验的污染率统计
处理号??Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??图２－２不同基因型下胚轴的再生系数??Ｆｉｇ．?２－２?Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ?ｗｉｔｈ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ??注：用Ｄｕｎｃａｎ多重比较在＇＂ａ＝０．０５水平上做显著性测验，字母相同者表示差异不显著。下表同。??Ｎｏｔｅ：?Ｄｕｎｃａｎ＇ｓ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｒａｎｇｅ?ｔｅｓｔ，?ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ｌｅｔｔｅｒ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｎｏ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ａｔ??５％?ｌｅｖｅｌ．?Ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ａｓ?ｆｏｌｌｏｗｓ．??ｍｍｍ??图２－３愈伤组织、再生芽和丛生芽的形态??Ａ：?ＹＢ下胚轴愈伤组织；Ｂ：?ＹＢ下胚轴再生芽；Ｃ：?ＹＢ丛生芽；Ｄ：?ＹＢ带柄子叶再生芽；Ｅ：??ＭＳＨ带柄子叶愈伤组织；Ｆ：?ＸＢＣ下胚轴双芽点再生芽??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｆｏｒｍｓ?ｏｆ?ｃａｌｌｕｓ，?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｕｄ?ａｎｄ?ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ?ｂｕｄ??Ａ：?ＹＢ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ?ｃａｌｌｕｓ；?Ｂ：?ＹＢ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｂｕｄｓ；?Ｃ：?Ｔｈｅ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｓｈｏｏｔｓ?ｏｆ?ＹＢ；?Ｄ：?ＹＢ??ｐｅｔｉｏｌｅ?ｗｉｔｈ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｂｕｄ；?Ｅ：?ＭＳＨ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ?ｗｉｔｈ?ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃａｌｌｕｓ；?Ｆ：?ＸＢＣ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ??ｒ
甚至有的实验组没有出现再生芽，可能是因为基因型差异。??三种外植体都会在切口处形成愈伤组织，接种１０天左右，三种外植体都出现一??定程度的体积增大，但带柄子叶和叶柄的膨大倍数更高（图２－５，Ｂ）。可能是因为带柄??子叶和叶柄内都含有一定量的叶绿素，在培养室的光照下可以通过吸收培养基中的营??养元素进行一定的光合作用，特别是带柄子叶，其在体积上可以达到原来的２－３倍。??叶柄的一端形成愈伤组织后，会从愈伤组织中产生不定芽（图２－５，０。??２．５硝酸银对不定芽再生的影响??以‘Ｎａｕ－ＸＢＣ’萝卜为基因型，４天苗龄的无菌苗为外植体材料，除去生长点之后，??切取长度为０．５？１?ｃｍ的下胚轴，平铺在培养基上，每个培养皿接种１０个。以ＭＳ＋３??ｍｇ．Ｕ１?６－ＢＡ＋０．２?ｍｇ．Ｕ１?ＮＡＡ＋３％蔗糖＋０．８％琼脂为基本培养基，添加不同浓度的硝酸??银，接种２０天后统计其愈伤组织形成数、褐变数和再生不定芽数等数据。??１６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]萝卜离体再生体系的建立[J]. 黄俊豪,徐文玲,刘贤娴,刘辰,王淑芬,杨建平. 山东农业科学. 2016(04)
[2]木本植物再生植株生根的研究进展[J]. 王琼,郭小兵,郭玉寿. 山西林业科技. 2014(03)
[3]不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响[J]. 胡伟,陈豫,伍洋. 江苏农业科学. 2014(07)
[4]多胺氧化酶活性及木质素沉积与菊花花芽分化的关系[J]. 徐东花,郭俊娥,徐璐,孙霞,孙宪芝. 华北农学报. 2014(03)
[5]萝卜下胚轴高效再生体系的建立[J]. 李媛媛,王冰林,韩佳,郑慧敏,何珊,胡玉荣,张军. 江苏农业科学. 2014(01)
[6]影响植物抗氧化酶活性的因素及其研究热点和现状[J]. 李璇,岳红,王升,黄璐琦,马炯,郭兰萍. 中国中药杂志. 2013(07)
[7]外源激素处理对甘蔗试管苗瓶外生根的影响[J]. 汪淼,方锋学,何为中,刘红坚,游建华,李松,翁梦苓,韦明珠. 安徽农业科学. 2012(16)
[8]萝卜带柄子叶高频再生体系的建立[J]. 李海萍,张鲁刚,张静,茹磊,刘学成,孙希禄. 植物学报. 2011(03)
[9]影响文冠果组织培养苗离体生根的因素[J]. 黄永伟,贾明仁,王洪波,朱立明,盖永佳. 北方果树. 2010(04)
[10]萝卜组织和器官的离体培养[J]. 王辉,田义轲,刘维信,程斐,相元萍. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2009(02)
硕士论文
[1]不结球白菜离体培养再生体系的优化及抗病转基因研究[D]. 陈敏敏.南京农业大学 2007
[2]外源生长素和多胺对M26试管苗不定根发生效应的研究[D]. 辛蓓.河北农业大学 2006
本文编号：3466799
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１消毒试验的污染率统计
处理号??Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??图２－２不同基因型下胚轴的再生系数??Ｆｉｇ．?２－２?Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ?ｗｉｔｈ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ??注：用Ｄｕｎｃａｎ多重比较在＇＂ａ＝０．０５水平上做显著性测验，字母相同者表示差异不显著。下表同。??Ｎｏｔｅ：?Ｄｕｎｃａｎ＇ｓ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｒａｎｇｅ?ｔｅｓｔ，?ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ｌｅｔｔｅｒ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｎｏ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ａｔ??５％?ｌｅｖｅｌ．?Ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ａｓ?ｆｏｌｌｏｗｓ．??ｍｍｍ??图２－３愈伤组织、再生芽和丛生芽的形态??Ａ：?ＹＢ下胚轴愈伤组织；Ｂ：?ＹＢ下胚轴再生芽；Ｃ：?ＹＢ丛生芽；Ｄ：?ＹＢ带柄子叶再生芽；Ｅ：??ＭＳＨ带柄子叶愈伤组织；Ｆ：?ＸＢＣ下胚轴双芽点再生芽??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｆｏｒｍｓ?ｏｆ?ｃａｌｌｕｓ，?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｕｄ?ａｎｄ?ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ?ｂｕｄ??Ａ：?ＹＢ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ?ｃａｌｌｕｓ；?Ｂ：?ＹＢ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｂｕｄｓ；?Ｃ：?Ｔｈｅ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｓｈｏｏｔｓ?ｏｆ?ＹＢ；?Ｄ：?ＹＢ??ｐｅｔｉｏｌｅ?ｗｉｔｈ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｂｕｄ；?Ｅ：?ＭＳＨ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ?ｗｉｔｈ?ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃａｌｌｕｓ；?Ｆ：?ＸＢＣ?ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ??ｒ
甚至有的实验组没有出现再生芽，可能是因为基因型差异。??三种外植体都会在切口处形成愈伤组织，接种１０天左右，三种外植体都出现一??定程度的体积增大，但带柄子叶和叶柄的膨大倍数更高（图２－５，Ｂ）。可能是因为带柄??子叶和叶柄内都含有一定量的叶绿素，在培养室的光照下可以通过吸收培养基中的营??养元素进行一定的光合作用，特别是带柄子叶，其在体积上可以达到原来的２－３倍。??叶柄的一端形成愈伤组织后，会从愈伤组织中产生不定芽（图２－５，０。??２．５硝酸银对不定芽再生的影响??以‘Ｎａｕ－ＸＢＣ’萝卜为基因型，４天苗龄的无菌苗为外植体材料，除去生长点之后，??切取长度为０．５？１?ｃｍ的下胚轴，平铺在培养基上，每个培养皿接种１０个。以ＭＳ＋３??ｍｇ．Ｕ１?６－ＢＡ＋０．２?ｍｇ．Ｕ１?ＮＡＡ＋３％蔗糖＋０．８％琼脂为基本培养基，添加不同浓度的硝酸??银，接种２０天后统计其愈伤组织形成数、褐变数和再生不定芽数等数据。??１６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]萝卜离体再生体系的建立[J]. 黄俊豪,徐文玲,刘贤娴,刘辰,王淑芬,杨建平. 山东农业科学. 2016(04)
[2]木本植物再生植株生根的研究进展[J]. 王琼,郭小兵,郭玉寿. 山西林业科技. 2014(03)
[3]不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响[J]. 胡伟,陈豫,伍洋. 江苏农业科学. 2014(07)
[4]多胺氧化酶活性及木质素沉积与菊花花芽分化的关系[J]. 徐东花,郭俊娥,徐璐,孙霞,孙宪芝. 华北农学报. 2014(03)
[5]萝卜下胚轴高效再生体系的建立[J]. 李媛媛,王冰林,韩佳,郑慧敏,何珊,胡玉荣,张军. 江苏农业科学. 2014(01)
[6]影响植物抗氧化酶活性的因素及其研究热点和现状[J]. 李璇,岳红,王升,黄璐琦,马炯,郭兰萍. 中国中药杂志. 2013(07)
[7]外源激素处理对甘蔗试管苗瓶外生根的影响[J]. 汪淼,方锋学,何为中,刘红坚,游建华,李松,翁梦苓,韦明珠. 安徽农业科学. 2012(16)
[8]萝卜带柄子叶高频再生体系的建立[J]. 李海萍,张鲁刚,张静,茹磊,刘学成,孙希禄. 植物学报. 2011(03)
[9]影响文冠果组织培养苗离体生根的因素[J]. 黄永伟,贾明仁,王洪波,朱立明,盖永佳. 北方果树. 2010(04)
[10]萝卜组织和器官的离体培养[J]. 王辉,田义轲,刘维信,程斐,相元萍. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2009(02)
硕士论文
[1]不结球白菜离体培养再生体系的优化及抗病转基因研究[D]. 陈敏敏.南京农业大学 2007
[2]外源生长素和多胺对M26试管苗不定根发生效应的研究[D]. 辛蓓.河北农业大学 2006
本文编号：3466799
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