香菇草酰乙酸水解酶基因LeOAH1克隆及表达分析

发布时间：2021-11-02 21:35

　　草酰乙酸水解酶（Oxaloacetate acetylhydrolase/Oxaloacetate hydrolase）是香菇（Lentinula edodes）中草酸合成的关键性酶,克隆香菇LeOAH1,并分析其在香菇体内与体外的表达情况,旨为研究香菇LeOAH1的功能奠定基础。从香菇L808中克隆LeOAH1,并进行生物信息学分析,采用 RT-PCR 和高效液相技术检测 LeOAH1在不同pH条件下香菇菌丝内的表达情况和草酸含量。此外,构建了重组原核表达载体 pET28a-oah1,在大肠杆菌中进行体外表达。基因克隆结果表明,该基因的gDNA长度为1 906 bp,cDNA长度为 1 356 bp,编码氨基酸数量为451个,蛋白分子质量约为48.9 kD,等电点为 6.80。生物信息学分析表明:该酶为不稳定的疏水性蛋白,具有α-螺旋（40.08%）、无规则卷曲（34.59%）、延伸链（17.52%）、β-折叠（7.10%）4种二级结构;亚细胞定位在细胞质中;序列比对的结果显示该酶有保守结构域;系统发育树分析该蛋白,与日本香菇OAH的相似度最高,同源性为82%;其次是灰光柄菇,同源性... 

【文章来源】：生物技术通报. 2020,36(09)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 供试菌种
        1.1.2 主要试剂与设备
    1.2 方法
        1.2.1 总DNA、RNA提取及cDNA合成
        1.2.2 LeOAH1的基因克隆
        1.2.3 香菇草酰乙酸水解酶LeOAH1基因的生物信息学分析
        1.2.4 不同pH条件下,草酸含量测定和LeOAH1基因表达分析
        1.2.5 蛋白的原核表达及SDS-PAGE分析
        1.2.6 数据分析
2 结果
    2.1 香菇LeOAH1基因克隆及基因结构分析
    2.2 香菇LeOAH1基因的同源性分析
    2.3 LeOAH1蛋白结构预测及分析
    2.4 不同pH条件下草酸含量与LeOAH1基因表达分析
    2.5 香菇LeOAH1原核表达分析
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]热胁迫下糙皮侧耳实时荧光定量PCR内参基因的选择[J]. 侯志浩,赵梦然,陈强,张妍,黄晨阳,邬向丽.  食用菌学报. 2019(03)
[2]甘蔗抗坏血酸过氧化物酶基因（ScAPX）的克隆及表达分析[J]. 王竹青,陈云,杨玉婷,苏亚春,陈珊珊,吴期滨,许莉萍.  农业生物技术学报. 2015(02)

硕士论文
[1]改造酿酒酵母乙酰辅酶A合成途径及其在香叶醇生产中的应用[D]. 伏贝贝.齐鲁工业大学 2018
[2]球孢白僵菌pH响应转录因子BbPacC的功能研究[D]. 周桥胜.西南大学 2015



本文编号：3472413