矮牵牛PhTFL1基因启动子特性分析及其下游基因挖掘
发布时间：2021-11-04 03:04
矮牵牛（Petunia hybrida）是当前应用较普遍的花卉,随着矮牵牛全基因组测序工作的完成,矮牵牛常用于植物分子进化生物学、花发育等相关研究。TFL1基因属于FT/TFL1基因家族,在大多数的研究报道中,FT基因的功能一般为促进成花转变,而TFL1基因的功能都集中在抑制开花和维持营养生长促进分支发育两个方面。在本实验室之前的研究中发现,矮牵牛FT亚家族中的Ph FT1发生了功能转变,表现出抑制开花的表型,替代了TFL1基因行使的开花抑制功能;而PhTFL1基因功能也和其他物种中不一样,PhTFL1基因在根系中表达水平最高,功能表现为影响矮牵牛根系发育,在矮牵牛中过量表达PhTFL1基因会严重抑制矮牵牛植株根系发育,而RNAi PhTFL1转基因矮牵牛株系的根系较野生型相比表现为侧根增多。为了进一步阐明矮牵牛PhTFL1基因影响植物根系发育的分子机制,我们对PhTFL1基因启动子进行了分析;在PhTFL1转基因株系幼苗期取样进行数字基因表达谱分析（RNA-seq）,分析了差异表达基因;最后克隆了PhTFL1基因互作基因VDAC2,初步分析了VDACs基因的序列与结构,并做了不同部位...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥开花调控网络（Frédéricetal2016）
矮牵牛PhTFL1基因启动子特性分析及其下游基因挖掘11表型强烈的干涉植株进行转录组测序及下游基因分析，为后续PhTFL1基因上下游通路研究奠定基础；同时克隆了PhTFL1a互作基因PhVDAC2及其同源基因，并对VDACs基因进行了初步的生信分析以及时空表达分析。本实验进一步研究PhTFL1基因的功能与分子机制，特别是互作蛋白及下游候选基因的的相关研究，对于探明PhTFL1基因功能的演变的分子机制提供了一些补充。1.7技术路线图1.2技术路线Fig.1.2Researchscheme备注：黑色字体为已完成部分红色字体为未完成部分
矮牵牛PhTFL1基因启动子特性分析及其下游基因挖掘212.3.2矮牵牛遗传转化与阳性检测本实验中选取处于营养生长阶段的野生型W115植株叶片依次摇菌进行侵染，叶片不宜太嫩也不宜老，侵染时间要准确把握，保证效率的同时也要防止农杆菌反菌及真菌污染。理论情况下，共培条件下培养3天后转入选培条件2周时能长出愈伤组织。转基因植株采用PCR扩增的方法检测阳性，在植株幼苗期取叶片提取DNA，用于PCR检测，根据检测结果保留阳性植株，种植到开花时，再次进行PCR阳性检测，确保用于自交收种子的矮牵牛植株为阳性转化苗。图2.1为TFL1c::GUS阳性转化苗自交收种子时第二次PCR检测胶图。扩增产物长度为750bp左右，结果表明用于收种的转基因株系均为阳性。图2.1PhTFL1c启动子融合表达载体转化矮牵牛PCR阳性检测M:标记；0:空白对照；1-12:转化苗Fig.2.1PositivePCRdetectioninPetuniatransformedwithPhTFL1cpromoterfusionexpressionvectorM:marker；0:blankcontrol；1-12:Transgenicplant2.3.3GUS染色定性分析PhTFL1a和PhTFL1c的启动子在连接GUS报告基因后，转化矮牵牛W115植株，经T0代PCR检测验证阳性后，收取T0代自交种子播种，用于检测启动子表达特点。为了观察PhTFL1a和PhTFL1c启动子在全发育时期的表达特点，我们首先利用组织化学染色的方法检测了启动子的表达模式。由于不可抗原因，
【参考文献】：
期刊论文
[1]酵母双杂交筛选水稻OsJAG互作蛋白[J]. 孔兰,王锋,蔡正正,邱荣华,吴春燕,段远霖,吴为人. 基因组学与应用生物学. 2019(10)
[2]高保守性启动子短序列建模研究[J]. 陈虹,赵海峰,王畅畅,施梦军,马猛. 基因组学与应用生物学. 2017(11)
[3]适于基因组测序的高纯度的大豆线粒体基因组DNA提取方法[J]. 李玉秋,张春宝,赵洪锟,谭化,费晓燕,赵丽梅,董英山. 基因组学与应用生物学. 2015(08)
[4]脱落酸通过影响生长素合成及分布抑制拟南芥主根伸长[J]. 袁冰剑,张森磊,曹萌萌,王志娟,李霞. 中国生态农业学报. 2014(11)
[5]VDAC3与ABA受体蛋白相互作用的验证以及初步研究[J]. 蔡黎,李德款,刘志斌,冯俊,陈存,李旭锋,杨毅. 四川大学学报(自然科学版). 2013(05)
[6]乙烯在幼苗根生长发育中调控作用的研究进展[J]. 黄维娜,康玉凡. 中国农学通报. 2013(12)
[7]拟南芥AtGluRS相互作用蛋白质VDAC及其转基因植物表型分析[J]. 何菡,严金平,张建军,刘震,张皖蓉,童仕波,杨毅. 四川大学学报(自然科学版). 2010(02)
[8]烟草钾离子通道及转基因烟草抗逆性的研究进展[J]. 司丛丛,刘好宝,曲平治. 中国农学通报. 2010(02)
[9]高等植物启动子功能和结构研究进展[J]. 夏江东,夏平. 楚雄师范学院学报. 2005(03)
[10]植物基因启动子研究进展[J]. 张春晓,王文棋,蒋湘宁,陈雪梅. 遗传学报. 2004(12)
博士论文
[1]基于转录组比较的牡丹开花时间基因发掘[D]. 周华.北京林业大学 2015
硕士论文
[1]线粒体VDAC与玉米C型细胞质雄性不育的关系初探[D]. 徐浩.四川农业大学 2013
[2]水稻vdac、ant及HL-sp1基因的表达研究[D]. 罗凤燕.中南民族大学 2010
本文编号：3474870
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥开花调控网络（Frédéricetal2016）
矮牵牛PhTFL1基因启动子特性分析及其下游基因挖掘11表型强烈的干涉植株进行转录组测序及下游基因分析，为后续PhTFL1基因上下游通路研究奠定基础；同时克隆了PhTFL1a互作基因PhVDAC2及其同源基因，并对VDACs基因进行了初步的生信分析以及时空表达分析。本实验进一步研究PhTFL1基因的功能与分子机制，特别是互作蛋白及下游候选基因的的相关研究，对于探明PhTFL1基因功能的演变的分子机制提供了一些补充。1.7技术路线图1.2技术路线Fig.1.2Researchscheme备注：黑色字体为已完成部分红色字体为未完成部分
矮牵牛PhTFL1基因启动子特性分析及其下游基因挖掘212.3.2矮牵牛遗传转化与阳性检测本实验中选取处于营养生长阶段的野生型W115植株叶片依次摇菌进行侵染，叶片不宜太嫩也不宜老，侵染时间要准确把握，保证效率的同时也要防止农杆菌反菌及真菌污染。理论情况下，共培条件下培养3天后转入选培条件2周时能长出愈伤组织。转基因植株采用PCR扩增的方法检测阳性，在植株幼苗期取叶片提取DNA，用于PCR检测，根据检测结果保留阳性植株，种植到开花时，再次进行PCR阳性检测，确保用于自交收种子的矮牵牛植株为阳性转化苗。图2.1为TFL1c::GUS阳性转化苗自交收种子时第二次PCR检测胶图。扩增产物长度为750bp左右，结果表明用于收种的转基因株系均为阳性。图2.1PhTFL1c启动子融合表达载体转化矮牵牛PCR阳性检测M:标记；0:空白对照；1-12:转化苗Fig.2.1PositivePCRdetectioninPetuniatransformedwithPhTFL1cpromoterfusionexpressionvectorM:marker；0:blankcontrol；1-12:Transgenicplant2.3.3GUS染色定性分析PhTFL1a和PhTFL1c的启动子在连接GUS报告基因后，转化矮牵牛W115植株，经T0代PCR检测验证阳性后，收取T0代自交种子播种，用于检测启动子表达特点。为了观察PhTFL1a和PhTFL1c启动子在全发育时期的表达特点，我们首先利用组织化学染色的方法检测了启动子的表达模式。由于不可抗原因，
【参考文献】：
期刊论文
[1]酵母双杂交筛选水稻OsJAG互作蛋白[J]. 孔兰,王锋,蔡正正,邱荣华,吴春燕,段远霖,吴为人. 基因组学与应用生物学. 2019(10)
[2]高保守性启动子短序列建模研究[J]. 陈虹,赵海峰,王畅畅,施梦军,马猛. 基因组学与应用生物学. 2017(11)
[3]适于基因组测序的高纯度的大豆线粒体基因组DNA提取方法[J]. 李玉秋,张春宝,赵洪锟,谭化,费晓燕,赵丽梅,董英山. 基因组学与应用生物学. 2015(08)
[4]脱落酸通过影响生长素合成及分布抑制拟南芥主根伸长[J]. 袁冰剑,张森磊,曹萌萌,王志娟,李霞. 中国生态农业学报. 2014(11)
[5]VDAC3与ABA受体蛋白相互作用的验证以及初步研究[J]. 蔡黎,李德款,刘志斌,冯俊,陈存,李旭锋,杨毅. 四川大学学报(自然科学版). 2013(05)
[6]乙烯在幼苗根生长发育中调控作用的研究进展[J]. 黄维娜,康玉凡. 中国农学通报. 2013(12)
[7]拟南芥AtGluRS相互作用蛋白质VDAC及其转基因植物表型分析[J]. 何菡,严金平,张建军,刘震,张皖蓉,童仕波,杨毅. 四川大学学报(自然科学版). 2010(02)
[8]烟草钾离子通道及转基因烟草抗逆性的研究进展[J]. 司丛丛,刘好宝,曲平治. 中国农学通报. 2010(02)
[9]高等植物启动子功能和结构研究进展[J]. 夏江东,夏平. 楚雄师范学院学报. 2005(03)
[10]植物基因启动子研究进展[J]. 张春晓,王文棋,蒋湘宁,陈雪梅. 遗传学报. 2004(12)
博士论文
[1]基于转录组比较的牡丹开花时间基因发掘[D]. 周华.北京林业大学 2015
硕士论文
[1]线粒体VDAC与玉米C型细胞质雄性不育的关系初探[D]. 徐浩.四川农业大学 2013
[2]水稻vdac、ant及HL-sp1基因的表达研究[D]. 罗凤燕.中南民族大学 2010
本文编号：3474870
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