香菇转录本功能域蛋白Latcripin-9的表达、纯化及生物学活性研究
发布时间：2021-11-10 14:28
香菇C91-3菌株是本课题组经过多年筛选获得的一株具有较强应用价值的真菌。香菇C91-3菌株菌丝体发酵液具有较好的诱导肿瘤细胞凋亡的作用已经被本课题组所证实。在此基础上,通过生物信息学分析,初步筛选出一些与细胞凋亡相关的目的基因,并对其进行命名。再通过cDNA末端的快速扩增（Rapid Amplification of cDNA ends,RACE）方法和生物信息学比对,获得基因全长及相应的氨基酸序列。本实验的研究对象是香菇C91-3菌株Latcripin-9基因。目的:利用生物信息学方法寻找并确定Latcripin-9的基因序列、功能域片段及相应的氨基酸序列。对Latcripin-9蛋白的二级结构、三级结构进行分析预测,全面获取Latcripin-9基因的详细信息。构建原核表达载体pET32a（+）-Latcripin-9,IPTG诱导使Latcripin-9蛋白在大肠杆菌Rosetta-gami（DE3）中表达,并对诱导表达产物进行鉴定。通过生物信息学软件分析,预测出Latcripin-9蛋白的生物学活性及相应功能。...
【文章来源】：大连医科大学辽宁省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Latcripin-9基因全长序列验证M：DNAMarkerDL20001、2：PCR产物（M-MLV+，M-MLV-）
25图 3 Latcripin-9 基因核苷酸及相对应的氨基酸序列igure 3 The nucleotide sequence and the according amino acid sequence of Latcripin-9 full-length g1.4 Latcripin-9 蛋白的结构预测分析1.4.1 Latcripin-9 蛋白功能域组成及理化性质预测经 Pfam 数据库分析，可知 Latcripin-9 蛋白具有一个 DyP_Perox 结构域（见，再经在线预测软件 ExPASy ProtParam 对其进行预测分析可知，该功能域4 个氨基酸（具体氨基酸组成见表 3 所示），分子量为 28539.2Da，等电点为 4.4中，带正电荷的残基（Arg+Lys）总共 13 个，带负电荷的残基（Asp+Glu）总 个。不稳定指数为 31.21，脂肪指数为 73.98，亲水性为-0.431。其半衰期分别为0 hours（哺乳动物网织红细胞，体外），>20 hours（酵母，体内），>10 ho
图 4 Latcripin-9 蛋白功能域预测结果Figure 4 The calculating result of the functional domain of Latcripin-9 protein表 4 功能域片段的氨基酸组成Table 4 The Amino acid composition of the functional fragmentsAmino acid Number（个） Frequency（%）Ala (A)Arg (R)Asn (N)Asp (D)Cys (C)Gln (Q)Glu (E)Gly (G)His (H)Ile (I)Leu (L)Lys (K)2710252011711206824310.23.89.57.60.46.44.27.62.33.09.11.1
【参考文献】：
期刊论文
[1]Resveratrol: A potential challenger against gastric cancer[J]. Aida Zulueta,Anna Caretti,Paola Signorelli,Riccardo Ghidoni. World Journal of Gastroenterology. 2015(37)
[2]草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用[J]. 尹学哲,王玉娇,尹基峰,金梅花,金明,全吉淑. 食品科学. 2015(15)
[3]中华补血草5种黄酮类化合物抗氧化和抗肿瘤活性的比较[J]. 董蒙蒙,喻樊,刘佳,汤新慧,高静,徐永新. 江苏农业科学. 2015(02)
[4]2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,曾红梅,邹小农,张思维,赫捷. 中国肿瘤. 2015(01)
[5]过氧化氢酶与肿瘤[J]. 杜猛,邢汝东. 北京口腔医学. 2014(06)
[6]香菇C91-3转录本Unigene14872基因Pkinase结构域的克隆表达及其生物信息学分析[J]. 杜忠娟,钟民涛,伦永志,刘奔,张伟,王晓丽,李星云,曹靖,宁安红,黄敏. 微生物学杂志. 2014(01)
[7]中国2010年恶性肿瘤发病与死亡[J]. 陈万青,张思维,曾红梅,郑荣寿,邹小农,赵平,吴良有,李光琳,赫捷. 中国肿瘤. 2014(01)
[8]DNA损伤修复调控因子与肿瘤耐药的研究进展[J]. 赵欣楠,魏敏杰,赵琳. 现代肿瘤医学. 2013(11)
[9]体外蛋白质复性方法及小分子添加剂在复性过程中的作用[J]. 余秀娟,赵丽艳,张晓光. 河北北方学院学报(自然科学版). 2013(02)
[10]DNA损伤修复反应的双刃剑效应在肿瘤与衰老发生发展中的作用[J]. 李小曼,徐红德,蔺美娜,宋晓宇,冯艳玲,羿菲,刘爽,曹流. 中国细胞生物学学报. 2013(02)
本文编号：3487436
【文章来源】：大连医科大学辽宁省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Latcripin-9基因全长序列验证M：DNAMarkerDL20001、2：PCR产物（M-MLV+，M-MLV-）
25图 3 Latcripin-9 基因核苷酸及相对应的氨基酸序列igure 3 The nucleotide sequence and the according amino acid sequence of Latcripin-9 full-length g1.4 Latcripin-9 蛋白的结构预测分析1.4.1 Latcripin-9 蛋白功能域组成及理化性质预测经 Pfam 数据库分析，可知 Latcripin-9 蛋白具有一个 DyP_Perox 结构域（见，再经在线预测软件 ExPASy ProtParam 对其进行预测分析可知，该功能域4 个氨基酸（具体氨基酸组成见表 3 所示），分子量为 28539.2Da，等电点为 4.4中，带正电荷的残基（Arg+Lys）总共 13 个，带负电荷的残基（Asp+Glu）总 个。不稳定指数为 31.21，脂肪指数为 73.98，亲水性为-0.431。其半衰期分别为0 hours（哺乳动物网织红细胞，体外），>20 hours（酵母，体内），>10 ho
图 4 Latcripin-9 蛋白功能域预测结果Figure 4 The calculating result of the functional domain of Latcripin-9 protein表 4 功能域片段的氨基酸组成Table 4 The Amino acid composition of the functional fragmentsAmino acid Number（个） Frequency（%）Ala (A)Arg (R)Asn (N)Asp (D)Cys (C)Gln (Q)Glu (E)Gly (G)His (H)Ile (I)Leu (L)Lys (K)2710252011711206824310.23.89.57.60.46.44.27.62.33.09.11.1
【参考文献】：
期刊论文
[1]Resveratrol: A potential challenger against gastric cancer[J]. Aida Zulueta,Anna Caretti,Paola Signorelli,Riccardo Ghidoni. World Journal of Gastroenterology. 2015(37)
[2]草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用[J]. 尹学哲,王玉娇,尹基峰,金梅花,金明,全吉淑. 食品科学. 2015(15)
[3]中华补血草5种黄酮类化合物抗氧化和抗肿瘤活性的比较[J]. 董蒙蒙,喻樊,刘佳,汤新慧,高静,徐永新. 江苏农业科学. 2015(02)
[4]2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,曾红梅,邹小农,张思维,赫捷. 中国肿瘤. 2015(01)
[5]过氧化氢酶与肿瘤[J]. 杜猛,邢汝东. 北京口腔医学. 2014(06)
[6]香菇C91-3转录本Unigene14872基因Pkinase结构域的克隆表达及其生物信息学分析[J]. 杜忠娟,钟民涛,伦永志,刘奔,张伟,王晓丽,李星云,曹靖,宁安红,黄敏. 微生物学杂志. 2014(01)
[7]中国2010年恶性肿瘤发病与死亡[J]. 陈万青,张思维,曾红梅,郑荣寿,邹小农,赵平,吴良有,李光琳,赫捷. 中国肿瘤. 2014(01)
[8]DNA损伤修复调控因子与肿瘤耐药的研究进展[J]. 赵欣楠,魏敏杰,赵琳. 现代肿瘤医学. 2013(11)
[9]体外蛋白质复性方法及小分子添加剂在复性过程中的作用[J]. 余秀娟,赵丽艳,张晓光. 河北北方学院学报(自然科学版). 2013(02)
[10]DNA损伤修复反应的双刃剑效应在肿瘤与衰老发生发展中的作用[J]. 李小曼,徐红德,蔺美娜,宋晓宇,冯艳玲,羿菲,刘爽,曹流. 中国细胞生物学学报. 2013(02)
本文编号：3487436
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