罗田甜柿（Diospyros kaki Thunb.）酵母杂交cDNA文库构建及DkPDC2启动子文库筛选
发布时间：2021-11-23 16:30
日本原产完全甜柿（简称“日本甜柿”或JPCNA）自然脱涩是随果实发育其果肉中单宁细胞的数量相对其他鞣细胞而言所占比例下降（俗称“稀释效应”）所致,而中国原产完全甜柿（简称“中国甜柿”或CPCNA）自然脱涩不仅与“稀释效应”有关,而且与果实成熟前可溶性单宁向不溶性单宁的转变（俗称“凝固效应”）具有更为直接的关系。前人研究已经明确,中国甜柿自然脱涩与乙醛代谢关键酶基因ADH和PDC密切相关。本研究选择中国甜柿‘罗田甜柿’和‘鄂柿1号’为试材,同时以日本甜柿‘阳丰’和非完全甜柿‘磨盘柿’作为对照,首先克隆获得ADH和PDC家族成员全长,并比较不同脱涩类型品种中该基因序列差异性;进而,通过染色体步移法分离获得ADH和PDC家族成员启动子序列;以‘罗田甜柿’不同组织（花、叶片、茎段、萼片、果皮、果肉、果心和种子）、不同时期（花后2.5、5、10、15、20和25周）样品为试材,构建其酵母杂交cDNA文库;最后,基于ADH和PDC启动子序列构建载体并用于酵母杂交cDNA文库筛选。以期筛选出与中国甜柿自然脱涩相关的转录因子,从而为阐明其自然脱涩的分子调控网络提供科学依据。主要研究结果如下:1.利用N...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 前人研究进展
1.2.1 柿单宁研究进展
1.2.2 柿单宁凝固效应研究进展
1.2.3 植物基因启动子结构分析
1.2.4 酵母单杂交系统
1.3 本课题研究内容
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 基因全长扩增
2.2.2 启动子克隆
2.2.3 cDNA文库的建立
2.2.4 载体构建及文库筛选
3 结果与分析
3.1 总RNA提取和质量检测
3.2 总DNA提取和质量检测
3.3 不同品种ADH和PDC全长扩增
3.3.1 不同品种ADH基因cDNA全长扩增
3.3.2 不同品种PDC基因cDNA全长扩增
3.4 不同品种ADH和PDC基因启动子克隆
3.5 ‘罗田甜柿’酵母杂交cDNA文库构建
3.5.1 mRNA分离与质量检测
3.5.2 cDNA文库（Uncut型）质量检测
3.5.3 酵母杂交AD-cDNA文库质量检测
3.6 酵母单杂交文库筛选
3.6.1 pPDC2-AbAi载体构建
3.6.2 Y1HGold[pPDC2-AbAi]诱饵菌株构建
3.6.3 最低Ab A抑制浓度筛选
3.6.4 Y1HGold[pPDC2-AbAi]菌株文库筛选
4 讨论
4.1 不同脱涩类型柿品种ADH和PDC基因序列保守性和差异性
4.2 基于启动子序列研究相关基因功能的可能性
4.3 中国甜柿‘罗田甜柿’酵母杂交AD-cDNA文库构建及其意义
5 进一步工作设想
参考文献
附录
作者简历及在学期间的科研活动
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]真核生物启动子研究概述[J]. 李圣彦,郎志宏,黄大昉. 生物技术进展. 2014(03)
[2]一种改良的植物DNA提取方法[J]. 李金璐,王硕,于婧,王玲,周世良. 植物学报. 2013(01)
[3]‘红阳’猕猴桃cDNA文库构建及F3H基因的表达初探[J]. 杨红丽,王彦昌,姜正旺,黄宏文. 遗传. 2009(12)
[4]原花青素的生物合成途径、功能基因和代谢工程[J]. 赵文军,张迪,马丽娟,柴友荣. 植物生理学通讯. 2009(05)
[5]植物基因启动子的克隆及其功能研究进展[J]. 聂丽娜,夏兰琴,徐兆师,高东尧,李琳,于卓,陈明,李连城,马有志. 植物遗传资源学报. 2008(03)
[6]柿子单宁对几种蛇毒中主要酶的抑制作用及其机理初探[J]. 顾海峰,梁晋鄂,李春美,张洁,窦宏亮. 中国农业科学. 2008(03)
[7]cDNA文库的构建策略及其应用[J]. 杨成君,王军. 生物技术通报. 2007(01)
[8]部分中国原产甜柿种质果实脱涩类型的鉴定[J]. 张永卓,张艳芳,罗正荣. 园艺学报. 2006(02)
[9]高等植物启动子功能和结构研究进展[J]. 夏江东,程在全,吴渝生,季鹏章. 云南农业大学学报. 2006(01)
[10]柿单宁细胞形态特征及发育动态研究[J]. 杨勇,阮小凤,王仁梓,李高潮. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2003(06)
博士论文
[1]中国原产完全甜柿自然脱涩机理研究[D]. 王燕.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]与柿单宁自然凝固相关的ALDH2基因家族克隆与表达分析[D]. 丁金鸽.华中农业大学 2015
[2]中国原产完全甜柿‘鄂柿1号’自然脱涩特点研究[D]. 陈道明.华中农业大学 2008
本文编号：3514261
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 前人研究进展
1.2.1 柿单宁研究进展
1.2.2 柿单宁凝固效应研究进展
1.2.3 植物基因启动子结构分析
1.2.4 酵母单杂交系统
1.3 本课题研究内容
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 基因全长扩增
2.2.2 启动子克隆
2.2.3 cDNA文库的建立
2.2.4 载体构建及文库筛选
3 结果与分析
3.1 总RNA提取和质量检测
3.2 总DNA提取和质量检测
3.3 不同品种ADH和PDC全长扩增
3.3.1 不同品种ADH基因cDNA全长扩增
3.3.2 不同品种PDC基因cDNA全长扩增
3.4 不同品种ADH和PDC基因启动子克隆
3.5 ‘罗田甜柿’酵母杂交cDNA文库构建
3.5.1 mRNA分离与质量检测
3.5.2 cDNA文库（Uncut型）质量检测
3.5.3 酵母杂交AD-cDNA文库质量检测
3.6 酵母单杂交文库筛选
3.6.1 pPDC2-AbAi载体构建
3.6.2 Y1HGold[pPDC2-AbAi]诱饵菌株构建
3.6.3 最低Ab A抑制浓度筛选
3.6.4 Y1HGold[pPDC2-AbAi]菌株文库筛选
4 讨论
4.1 不同脱涩类型柿品种ADH和PDC基因序列保守性和差异性
4.2 基于启动子序列研究相关基因功能的可能性
4.3 中国甜柿‘罗田甜柿’酵母杂交AD-cDNA文库构建及其意义
5 进一步工作设想
参考文献
附录
作者简历及在学期间的科研活动
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]真核生物启动子研究概述[J]. 李圣彦,郎志宏,黄大昉. 生物技术进展. 2014(03)
[2]一种改良的植物DNA提取方法[J]. 李金璐,王硕,于婧,王玲,周世良. 植物学报. 2013(01)
[3]‘红阳’猕猴桃cDNA文库构建及F3H基因的表达初探[J]. 杨红丽,王彦昌,姜正旺,黄宏文. 遗传. 2009(12)
[4]原花青素的生物合成途径、功能基因和代谢工程[J]. 赵文军,张迪,马丽娟,柴友荣. 植物生理学通讯. 2009(05)
[5]植物基因启动子的克隆及其功能研究进展[J]. 聂丽娜,夏兰琴,徐兆师,高东尧,李琳,于卓,陈明,李连城,马有志. 植物遗传资源学报. 2008(03)
[6]柿子单宁对几种蛇毒中主要酶的抑制作用及其机理初探[J]. 顾海峰,梁晋鄂,李春美,张洁,窦宏亮. 中国农业科学. 2008(03)
[7]cDNA文库的构建策略及其应用[J]. 杨成君,王军. 生物技术通报. 2007(01)
[8]部分中国原产甜柿种质果实脱涩类型的鉴定[J]. 张永卓,张艳芳,罗正荣. 园艺学报. 2006(02)
[9]高等植物启动子功能和结构研究进展[J]. 夏江东,程在全,吴渝生,季鹏章. 云南农业大学学报. 2006(01)
[10]柿单宁细胞形态特征及发育动态研究[J]. 杨勇,阮小凤,王仁梓,李高潮. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2003(06)
博士论文
[1]中国原产完全甜柿自然脱涩机理研究[D]. 王燕.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]与柿单宁自然凝固相关的ALDH2基因家族克隆与表达分析[D]. 丁金鸽.华中农业大学 2015
[2]中国原产完全甜柿‘鄂柿1号’自然脱涩特点研究[D]. 陈道明.华中农业大学 2008
本文编号：3514261
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