梨黑色斑点病的病原鉴定及其对梨叶侵染的显微观察

发布时间：2021-11-24 17:08

　　近年来,中国长江流域以南沿海沙梨产区新发生一种被称之为“梨黑色斑点病”的叶部病害。该病造成梨树叶片大量异常脱落,不仅削弱树势,影响当年梨产量和品质,造成严重的经济损失。然而引起该病害的病原及症状产生的机理不明,生产上对该病害尚缺乏有效防治办法。本研究通过形态学观察、多基因测序分析及致病性测定,旨在明确引起我国梨黑色斑点病的病原。在此基础上,为了探讨黑点症状产生的机理,利用ATMT方法对梨黑色斑点病菌进行遗传转化,筛选出遗传稳定、形态学特征和致病力相对野生型菌株没有发生显著变化的转化子,在梨叶上接种标记病菌并荧光显微观察其侵染。取得的主要研究结果如下:1.梨黑色斑点病的病原鉴定。2013年至2015年先后从我国福建、江西、广西、湖北等发生了黑色斑点病的梨树上采集病叶,分离获得菌株447个,观察这些分离物的菌落形态及无性态特征,并对福建省全部分离物及江西、广西、湖北等部分分离物的ITS序列进行测定分析,397个菌株鉴定为炭疽菌。对福建省的25个分离物进行多基因（GAPDH、CAL、ACT、CHS-1、TUB2及GS）及Apn2/MAT（ApMat）位点序列分析,结果显示397个炭疽菌为果生... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
第一章 文献综述
    1.1 梨黑色斑点病的发生与危害
    1.2 关于果树落叶的主要诱发因素
    1.3 由炭疽菌引起的果树叶部斑点病
    1.4 炭疽菌的鉴定方法
        1.4.1 形态学鉴定
        1.4.2 分子生物学鉴定
    1.5 植物炭疽菌侵染过程的研究
    1.6 分子标记技术在植物病原真菌侵染研究中的应用
        1.6.1 农杆菌介导的遗传转化
        1.6.2 绿色荧光蛋白标记
    1.7 研究的目的和意义
第二章 梨黑色斑点病的病原鉴定
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 病害的田间症状表现
        2.2.2 病原菌的分离纯化及形态学特征
        2.2.3 梨黑色斑点病菌致病性测定结果
        2.2.4 病原菌寄主范围的测定结果
        2.2.5 我国梨树黑色斑点病菌核苷酸序列分析结果
    2.3 结论与讨论
第三章 果生炭疽菌GFP标记及转化子菌株的筛选
    3.1 材料与方法
        3.1.1 供试菌株
        3.1.2 供试培养基
        3.1.3 主要试剂
    3.2 方法
        3.2.1 潮霉素B对果生炭疽菌生长的影响
        3.2.2 农杆菌菌液的制备
        3.2.3 转化子的获得
        3.2.4 转化子菌株的鉴定
        3.2.5 转化子菌株的筛选
    3.3 试验结果
        3.3.1 潮霉素对果生炭疽菌生长的影响
        3.3.2 转化子菌株的获得及验证
        3.3.3 转化子的筛选
    3.4 结论与讨论
第四章 果生炭疽菌对梨叶侵染的显微观察
    4.1 材料
        4.1.1 供试菌株
        4.1.2 试验材料
        4.1.3 主要仪器及试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 接种体的制备
        4.2.2 ‘翠冠’梨叶片的接种试验
    4.3 试验结果
    4.4 结论与讨论
第五章 全文结论与展望
参考文献
附录1 主要试剂及溶液的配制
附录2 硕士期间发表论文
附图
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]炭疽菌属真菌分类研究现状及发展趋势[J]. 韩长志.  中国植保导刊. 2015(06)
[2]农杆菌介导的苹果炭疽叶枯病菌遗传转化及插入突变体的筛选[J]. 张俊祥,吴建圆,冀志蕊,迟福梅,蒋晓玲,董庆龙,周宗山.  基因组学与应用生物学. 2014(06)
[3]苹果炭疽叶枯病病原Glomerella cingulata及其侵染过程[J]. 任斌,高小宁,韩青梅,黄丽丽.  植物保护学报. 2014(05)
[4]梨胶胞炭疽病菌的分离、鉴定及其生物学特性(英文)[J]. 刘邮洲,陈志谊,钱国良,聂亚峰,乔俊卿,刘凤权.  Agricultural Science & Technology. 2014(02)
[5]茶树炭疽菌Colletotrichum fructicola的鉴定及系统发育分析[J]. 刘威,叶乃兴,陈玉森,连玲丽,刘伟,金珊,赖建东,谢运海.  茶叶科学. 2014(01)
[6]农杆菌介导苹果炭疽病菌的遗传转化及转化子鉴定[J]. 王海艳,李保华,张清明,李桂舫,董向丽,王彩霞.  中国农业科学. 2013(09)
[7]福建省梨异常早期落叶初步调查与分析[J]. 陈义挺,刘鑫铭,陈小明,陈婷,王卫,张长和,包建平,黄新忠.  龙岩学院学报. 2011(05)
[8]绿色荧光蛋白在植物上应用研究进展[J]. 黄淑贤.  北京农业. 2010(21)
[9]福建梨早期大量落叶诱因与防控策略[J]. 黄新忠,陈义挺,雷龑,蔡盛华,陈小明.  中国农学通报. 2010(02)
[10]绿色荧光蛋白及其在农作物研究中的应用[J]. 余林辉,姚伟,段真珍,何正权,来佑勤.  安徽农业科学. 2008(36)



本文编号：3516413