栗疫病菌致病毒素提取及其活性测定

发布时间：2021-12-19 18:36

　　近些年来,板栗疫病的发病率越来越高,对板栗树的危害越来越严重,使板栗的产量大幅度减少,造成大量的经济损失,因此为了更好的对板栗疫病进行防治,板栗疫病病菌病毒素的研究就越来越重要。本研究以栗疫菌（Endothia parasitica）强毒力菌株Cfcc82606为基础,探究栗疫菌毒素粗提液的基本理化性质,以此为基础,运用各种有机溶剂萃取得到栗疫菌粗毒素,并且对粗毒素采用多次硅胶柱层析从中分离纯化毒素,并运用气相质谱联用技术（GC-MS）对分离纯化的毒素进行结构分析鉴定。主要的研究结果如下:1.将具有强致病力的栗疫菌菌株Cfcc82606（Endothia parasitica）的培养滤液,采用甲醇沉淀和离心得到蛋白和非蛋白类部分,经透析袋分析以及生物致病活性检测,推断栗疫菌毒素为非蛋白类小分子物质。对非蛋白类成分进行不同的温度、不同的PH值、不同时间的紫外线照射处理后,测定其致病活性的变化。结果表明:毒素有着较强的热稳定性,经过高压高温处理30min后,对板栗枝条仍具有致病性;毒素对酸碱性敏感,在酸性条件下毒性增强,碱性条件下毒性减弱;紫外线的照射对毒素具有削弱作用。通过7种不同极性的... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 板栗的价值
    1.2 栗疫病菌
        1.2.1 栗疫病的起源及其分布
        1.2.2 栗疫病菌的生物学特性
    1.3 植物病原菌毒素的研究进展
        1.3.1 植物病原真菌的致病因子
        1.3.2 毒素的类型
        1.3.3 毒素的化学类别
    1.4 毒素的提取技术与纯化方法
        1.4.1 毒素的提取技术
        1.4.2 毒素的纯化技术
        1.4.3 毒素组分分析技术
    1.5 毒素的生物活性检测方法
        1.5.1 叶片枝条的测定
        1.5.2 根生长测定法
        1.5.3 电解质渗漏和其他测定法
    1.6 真菌毒素的应用
        1.6.1 抗病育种
        1.6.2 解毒剂的应用
        1.6.3 在真菌分类中的应用
    1.7 研究目的与意义
第二章 材料与方法
    2.1 材料试剂及仪器
        2.1.1 测试菌株
        2.1.2 植物材料
        2.1.3 主要试剂与药品
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 培养基
    2.2 实验方法与技术路线
        2.2.1 栗疫菌Cfcc82606培养滤液的制备
        2.2.2 培养滤液中不同组分的致病性活性检测
        2.2.3 栗疫菌Cfcc82606毒素粗提液的基本性质测定
        2.2.4 毒素的寄主专化性测定
        2.2.5 病情指数计算
        2.2.6 栗疫菌Cfcc82606粗毒素的制备
        2.2.7 毒素的分离与纯化
        2.2.8 毒素的组分分析
        2.2.9 纯毒素生物检测
    2.3 技术路线
第三章 结果与分析
    3.1 栗疫菌致病成分的确定
    3.2 栗疫菌Cfcc82606非蛋白类毒素的基本性质
        3.2.1 毒素分子量大小
        3.2.2 温度对非蛋白类毒素的影响
        3.2.3 酸碱度对非蛋白类毒素的影响
        3.2.4 紫外光对非蛋白类毒素活性的影响
        3.2.5 非蛋白类毒素的极性确定
        3.2.6 板栗疫菌非蛋白类毒素的寄主专化性
    3.3 栗疫菌毒素的分离与纯化
        3.3.1 不同溶剂提取的毒素紫外吸收光谱
        3.3.2 最佳展开剂的确定
        3.3.3 第一次柱层析分离
        3.3.4 重复柱层析
        3.3.5 纯化后毒素的纯度检测
    3.4 毒素各部分气质联用（GC-MS）分析
        3.4.1 毒素Ⅰ检测结果分析
        3.4.2 毒素Ⅱ检测结果分析
        3.4.3 毒素Ⅲ检测结果分析
    3.5 纯毒素生物检测
第四章 结论与讨论
    4.1 栗疫菌毒素的基本性质
    4.2 栗疫菌毒素的萃取、纯化
    4.3 栗疫菌毒素的本质
    4.4 栗疫菌纯毒素的生物活性检测
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]板栗的研究现状[J]. 赵苏娴,韩伟,艾呈祥,沈广宁.  落叶果树. 2011(05)
[2]抗栗疫病板栗品种及优系鉴定[J]. 程中平,吴群,黄俊斌,胡春根,王章利.  中国南方果树. 2011(03)
[3]寄生隐丛赤壳菌致病毒素Cp-I的分离纯化和结构分析[J]. 韩珊,朱天辉.  菌物学报. 2009(04)
[4]百日草链格孢菌粗毒素的生产、提取及稳定性的研究[J]. 李荣金,强胜.  中国生物工程杂志. 2006(08)
[5]坪草腐霉病菌毒素产生除草活性物质的条件优化[J]. 张金林,庞民好,刘颖超,张利辉,董金皋.  河北农业大学学报. 2005(04)
[6]枯斑盘多毛孢Pf-毒素活性组分的分离纯化[J]. 朱天辉,叶华智,罗孟军.  植物病理学报. 2003(06)
[7]玉米大斑病菌特异性毒素组分的分离与纯化[J]. 张利辉,刘云惠,董金皋,李正平.  植物病理学报. 2003(01)
[8]板栗自然居群疫病发生研究[J]. 刘德兵,魏军亚,秦岭,李绍鹏.  西北林学院学报. 2002(04)
[9]肉桂枝枯病菌毒素的研究[J]. 王军,李若英.  林业科学研究. 2002(04)
[10]植物病原真菌毒素[J]. 罗孟军,朱天辉.  四川林业科技. 2001(03)

硕士论文
[1]水稻纹枯病菌毒素的提纯、组分分析及钝化[D]. 孟令军.扬州大学 2009
[2]立枯丝核菌毒素的产生及与致病力的关系[D]. 张华东.扬州大学 2003



本文编号：3544865