露地菊‘火焰’胁迫响应基因CmPIP的初步研究
发布时间：2021-12-23 02:17
露地菊（Chrysanthemum morifolium）是菊科、菊属的多年生宿根草本植物。露地菊是在地被菊基础上获得的具有优良性状的新品种。露地菊具有植株低矮,管理粗放,观赏价值高,抗逆性强等特点,是北方最常见的景观植物。质膜内在蛋白（Plasma membrane intrinsic proteins,PIPs）作为水孔蛋白超家族MIP家族的一员,在植物抗逆过程中起到至关重要的作用。本试验从露地菊试验品种的抗逆性出发,根据已有的关于PIPs水孔蛋白的相关抗逆性研究及其在转基因植株抗逆过程中发挥的作用,利用相关生物信息学手段分析其他物种中已知的PIP基因序列,通过分子克隆技术获得露地菊CmPIP基因序列,进行相关的功能性研究,探寻CmPIP基因在植物抗逆过程中的表达模式。研究获得转基因露地菊再生植株,在一定程度上获得抗逆性更强的植株,为进一步研究露地菊抵抗胁迫环境,研究露地菊抗逆机理,改良露地菊抗逆特性,提高抗逆生长能力奠定基础。本研究的主要结果如下:1.以东北林业大学花卉研究所培育的露地菊‘火焰’品系作为试验材料,利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）克隆获得露地菊CmPIP基因...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１露地菊‘火焰’??２．１．１．２试剂??
?２露地菊水孔蛋白ＣｍＰＩＰｓ基因的克隆及序列分析???计算距离的方法。??２．２．１结果与分析??２．２．１．１露地菊总ＲＮＡ的提取??利用ＴＲＩｚｏｒ法提取露地菊叶片总ＲＮＡ，琼脂糖凝胶电泳检测，紫外凝胶成像系统获??得检测照片（图２－２）。可以看出２８ｓ和１８ｓ两条明显的核糖体ＲＮＡ条带，亮度比约为２：１，??没有明显的降解。提取样品浓度为１．０２１４＾§４＾，人２６０／２８０为１．９６。??圆???州??圓＾＊?Ｉ８Ｓ??…ｖ．：ｋ?＼??图２－２露地菊叶片总ＲＮＡ??２．２．１．２露地菊ＣＷＶ尸基因克隆??以露地菊总ＲＮＡ反转录获得的ｃＤＮ’ＡＡ模板，使用特异引物（表２－１）克隆获得??保守区序列，得到２００?ｂｐ条带（图２－３）。测序获得核酸序列信息（图２－４）。以保??守区序列为模板，５’端使用基因特异性引物和锚定引物（Ａｎｃｈｏｒ）和接头引物??（Ａｄａｐｔｏｒ），?３’端特异性引物以及Ｐ１８Ｅ和Ｐ１９Ｅ?（表２－４），进行ＰＣＲ扩增。琼脂糖凝胶电泳??检测扩增产物。结果５’端获得两条片段，长度分别为６５０?ｂｐ和６００?ｂｐ?（图２－５）；?３’端获得??一条长为７００?ｂｐ的片段（图２－５）。??Ｍ?１??丨丨｜丨｜丨＿ｆ丨丨叫??２０００ｂｐ?一??２５０ｂｐ?—??Ｍ：ＤＬ２０００Ｍａｋｅｒ；?１：?Ｃｏｔ尸／／Ｍ呆守区??图２－３?Ｃｗ／ＶＰ保守区电泳图??－１７－??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]植物抗旱耐盐机理的研究进展[J]. 胡兴旺,金杭霞,朱丹华. 中国农学通报. 2015(24)
[2]植物安全转基因技术研究现状与展望[J]. 王根平,杜文明,夏兰琴. 中国农业科学. 2014(05)
[3]植物转基因技术的诞生和发展[J]. 杨长青,王凌健,毛颖波,陈晓亚. 生命科学. 2011(02)
[4]菊花种质资源研究进展[J]. 张莉俊,戴思兰. 植物学报. 2009(05)
[5]植物抗旱相关基因研究进展[J]. 唐益苗,赵昌平,高世庆,田立平,单福华,吴敬新. 麦类作物学报. 2009(01)
[6]安全标记基因在转基因植物中的应用[J]. 符勇耀,杨迎伍,邓伟,李正国. 生物技术通报. 2008(06)
[7]盐胁迫对NHC牧草叶片保护酶系统,MDA含量及膜透性的影响[J]. 刘延吉,张珊珊,田晓艳,任大明. 草原与草坪. 2008(02)
[8]德抗961小麦耐盐生理特性研究[J]. 梁超,王超,杨秀风,张秀田,王玮. 西北植物学报. 2006(10)
[9]逆境条件下几种蔬菜作物生理指标的变化[J]. 鲁福成,王明启,魏雪生,王姝,张仲国. 天津农业科学. 2001(02)
[10]不同育秧方式对早稻叶片SOD活性、电解质渗透率和发根力的影响[J]. 童富淡,胡家恕,陈进红,赵国平. 浙江农业大学学报. 1997(06)
本文编号：3547579
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１露地菊‘火焰’??２．１．１．２试剂??
?２露地菊水孔蛋白ＣｍＰＩＰｓ基因的克隆及序列分析???计算距离的方法。??２．２．１结果与分析??２．２．１．１露地菊总ＲＮＡ的提取??利用ＴＲＩｚｏｒ法提取露地菊叶片总ＲＮＡ，琼脂糖凝胶电泳检测，紫外凝胶成像系统获??得检测照片（图２－２）。可以看出２８ｓ和１８ｓ两条明显的核糖体ＲＮＡ条带，亮度比约为２：１，??没有明显的降解。提取样品浓度为１．０２１４＾§４＾，人２６０／２８０为１．９６。??圆???州??圓＾＊?Ｉ８Ｓ??…ｖ．：ｋ?＼??图２－２露地菊叶片总ＲＮＡ??２．２．１．２露地菊ＣＷＶ尸基因克隆??以露地菊总ＲＮＡ反转录获得的ｃＤＮ’ＡＡ模板，使用特异引物（表２－１）克隆获得??保守区序列，得到２００?ｂｐ条带（图２－３）。测序获得核酸序列信息（图２－４）。以保??守区序列为模板，５’端使用基因特异性引物和锚定引物（Ａｎｃｈｏｒ）和接头引物??（Ａｄａｐｔｏｒ），?３’端特异性引物以及Ｐ１８Ｅ和Ｐ１９Ｅ?（表２－４），进行ＰＣＲ扩增。琼脂糖凝胶电泳??检测扩增产物。结果５’端获得两条片段，长度分别为６５０?ｂｐ和６００?ｂｐ?（图２－５）；?３’端获得??一条长为７００?ｂｐ的片段（图２－５）。??Ｍ?１??丨丨｜丨｜丨＿ｆ丨丨叫??２０００ｂｐ?一??２５０ｂｐ?—??Ｍ：ＤＬ２０００Ｍａｋｅｒ；?１：?Ｃｏｔ尸／／Ｍ呆守区??图２－３?Ｃｗ／ＶＰ保守区电泳图??－１７－??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]植物抗旱耐盐机理的研究进展[J]. 胡兴旺,金杭霞,朱丹华. 中国农学通报. 2015(24)
[2]植物安全转基因技术研究现状与展望[J]. 王根平,杜文明,夏兰琴. 中国农业科学. 2014(05)
[3]植物转基因技术的诞生和发展[J]. 杨长青,王凌健,毛颖波,陈晓亚. 生命科学. 2011(02)
[4]菊花种质资源研究进展[J]. 张莉俊,戴思兰. 植物学报. 2009(05)
[5]植物抗旱相关基因研究进展[J]. 唐益苗,赵昌平,高世庆,田立平,单福华,吴敬新. 麦类作物学报. 2009(01)
[6]安全标记基因在转基因植物中的应用[J]. 符勇耀,杨迎伍,邓伟,李正国. 生物技术通报. 2008(06)
[7]盐胁迫对NHC牧草叶片保护酶系统,MDA含量及膜透性的影响[J]. 刘延吉,张珊珊,田晓艳,任大明. 草原与草坪. 2008(02)
[8]德抗961小麦耐盐生理特性研究[J]. 梁超,王超,杨秀风,张秀田,王玮. 西北植物学报. 2006(10)
[9]逆境条件下几种蔬菜作物生理指标的变化[J]. 鲁福成,王明启,魏雪生,王姝,张仲国. 天津农业科学. 2001(02)
[10]不同育秧方式对早稻叶片SOD活性、电解质渗透率和发根力的影响[J]. 童富淡,胡家恕,陈进红,赵国平. 浙江农业大学学报. 1997(06)
本文编号：3547579
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