百合（Lilium）茎尖超低温保存新技术的建立与超低温疗法脱毒、病毒检测研究
发布时间：2022-01-02 02:24
百合是多年生鳞茎植物,属百合科（Liliaccae）百合属（Lilium）植物。种质资源保存为新品种选育和遗传改良提供了基因资源。病毒病害是制约百合生产的关键因素之一。病毒检测是病毒病防治、无毒苗生产和海关检验检疫的必备技术。本研究以百合试管苗为试材,旨在（1）创建百合茎尖超低温保存的新技术,为百合种质资源超低温基因库的建立提供了技术平台;（2）初步建立了百合茎尖超低温疗法脱毒技术;（3）建立百合病毒的TAS-ELISA、RT-PCR、直接微样RT-PCR（microtissue direct RT-PCR,MD RT-PCR）和免疫组织化学定位法等多种病毒检测技术。本研究主要结果如下:1.以‘西伯利亚’百合（Lilium Oriental hybrid‘Siberia’）为试材,建立了带不定芽叶片小块超低温保存技术。将百合的叶片外植体培养在不定芽诱导培养基上,培养12天后,从叶片外植体上切取至少携带一个不定芽的叶方形小块（Small leaf squares,SLS,3×4mm）。将SLSs培养在含有0.5 M蔗糖的预培养基上培养1天,用有加载溶液处理20分钟,随后在0°C条件下,将...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
几个著名的百合品种注：a.‘西伯利亚’
图 1-2 几种常用的食用兰州百合。注：A.甘肃兰州大面积栽培的兰州百合。B.兰州百合的花。C.兰州百合鳞茎。D.龙牙百合。D1. 龙牙百合鳞茎. E.卷丹百合。Fig 1-2 Some most frequently-grown edible Lilies.ote：A. Field-grown Lanzhou lilies. B. Flowers of Lanzhou lily. C. Scale bulbs of Lanzhou lily. D. Liliumbrownii var.viridulum. D1. Scale bulbs ofLilium brownii var.viridulum. E. Lilium lancifolium.百合试管苗保存也有大量研究。陈辉等（2006）的研究发现，‘西伯利亚’百合 (L.riental hybrid‘Siberia’) 试管苗保存 9 个月后，存活率在 80%以上。万珠珠等（2016）道了三种食用百合的试管苗保存，龙芽百合和兰州百合保存 300 天后的存活率分别为6%和 94%, 川百合保存 150 天后的存活率为 100%。张玉芹等（2010，2011）对食用百的离体保存的研究也获得了较理想的结果。国外学者也对百合试管苗中短期保存做了量研究，保存时间长达 28 个月 (Bonnier et al. 1997)。试管苗保存需要无菌条件，占空间较大，费时、费工，成本较高；试管苗保存需要继代培养，可能诱导保存材料发遗传变异，并可能造成保存材料的污染，导致保存材料的丧失 (van Tuyl et al. 2011)。些缺点极大地限制了百合的试管苗保存。
图 2-1 东方百合‘西伯利亚’叶再生不定芽的 9d，12d，15d 形态学和组织学观察图注：（a，b）培养 9 天时不定芽的生长情况；（c，d）培养 12 天时不定芽的生长情况；（e，f）培养15 天时不定芽的生长情况。AD=顶端分生组织，LP=叶原基。a，c 和 e 比例尺为 1mm，b 和 d 比例尺为 20 μm，f 比例尺为 0.5mm。Fig.2-1 Morphological and histological observations of adventitious bud formation on SLSs of L.Oriental hybrid ‘Siberia’.Note: 9-(a, b), 12-(c, d) and 15- (e, f) day-old adventitious buds.AD apical dome, LP leaf primordium.Bars in a, c and e = 1mm, in b and d = 20μm, and in f = 0.5mm.2.4.3 SLSs 的超低温保存将 SLSs，在加载液中浸没 20 min，接着在 0°C 条件下，用 PVS2 脱水处理 4-9 h。将脱水处理后的 SLSs 转移到用铝箔制成的小皿之上（直径 7 cm），快速投入液氮之中，冻存 1h（+LN）。处理结束后，用镊子快速捞出带有 SLSs 的铝箔小皿，投入卸载液之中解冻及复温 20 min。将经过超低温处理的 SLSs 转移到 BM 培养基上，于培养间温度
【参考文献】：
期刊论文
[1]兰州百合粉营养成分及水分活度研究[J]. 吴霞明. 中国食物与营养. 2017(10)
[2]三种食用百合种质资源限制生长保存及遗传稳定性研究[J]. 万珠珠,牛来春,谭秀梅,刘敏,吴亮,董草. 北方园艺. 2016(13)
[3]百合种球脱毒技术研究进展[J]. 胡新颖,杨迎东,颜津宁,颜范悦. 江苏农业科学. 2014(04)
[4]卷丹百合脱毒快繁技术研究[J]. 周晓波,吴艺飞,丁茁荑. 中国农学通报. 2012(31)
[5]食用百合种质资源离体保存技术研究[J]. 张玉芹,李锡香,王海平. 北方园艺. 2011(02)
[6]食用百合试管苗缓慢生长保存的研究[J]. 张玉芹,冯建军,赵景芳. 中国蔬菜. 2010(24)
[7]茎尖培养及热处理技术在百合脱毒中的应用研究[J]. 高慧卿,樊兰瑛,王秀红,高宏樟. 山西农业大学学报(自然科学版). 2010(06)
[8]百合的脱病毒、快速繁殖技术的研究[J]. 邵增龙,高山林,黄和平,嵇恂,马莉. 药物生物技术. 2010(03)
[9]东方百合快繁培养基优化与脱毒技术研究[J]. 钟海丰,黄宇翔,邓朝生,江斌. 中国农学通报. 2009(17)
[10]食用百合脱毒快繁技术研究[J]. 陈丽,唐寅,张承妹,董举文,宋学孟. 上海农业学报. 2009(02)
博士论文
[1]葡萄茎尖超低温保存及超低温疗法脱毒研究[D]. 毕文璐.西北农林科技大学 2017
硕士论文
[1]东方百合病毒检测与茎尖超低温脱毒研究[D]. 靳慧洁.福建农林大学 2009
[2]中国野生百合资源调查及遗传多样性分析[D]. 王洁琼.北京林业大学 2006
本文编号：3563282
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
几个著名的百合品种注：a.‘西伯利亚’
图 1-2 几种常用的食用兰州百合。注：A.甘肃兰州大面积栽培的兰州百合。B.兰州百合的花。C.兰州百合鳞茎。D.龙牙百合。D1. 龙牙百合鳞茎. E.卷丹百合。Fig 1-2 Some most frequently-grown edible Lilies.ote：A. Field-grown Lanzhou lilies. B. Flowers of Lanzhou lily. C. Scale bulbs of Lanzhou lily. D. Liliumbrownii var.viridulum. D1. Scale bulbs ofLilium brownii var.viridulum. E. Lilium lancifolium.百合试管苗保存也有大量研究。陈辉等（2006）的研究发现，‘西伯利亚’百合 (L.riental hybrid‘Siberia’) 试管苗保存 9 个月后，存活率在 80%以上。万珠珠等（2016）道了三种食用百合的试管苗保存，龙芽百合和兰州百合保存 300 天后的存活率分别为6%和 94%, 川百合保存 150 天后的存活率为 100%。张玉芹等（2010，2011）对食用百的离体保存的研究也获得了较理想的结果。国外学者也对百合试管苗中短期保存做了量研究，保存时间长达 28 个月 (Bonnier et al. 1997)。试管苗保存需要无菌条件，占空间较大，费时、费工，成本较高；试管苗保存需要继代培养，可能诱导保存材料发遗传变异，并可能造成保存材料的污染，导致保存材料的丧失 (van Tuyl et al. 2011)。些缺点极大地限制了百合的试管苗保存。
图 2-1 东方百合‘西伯利亚’叶再生不定芽的 9d，12d，15d 形态学和组织学观察图注：（a，b）培养 9 天时不定芽的生长情况；（c，d）培养 12 天时不定芽的生长情况；（e，f）培养15 天时不定芽的生长情况。AD=顶端分生组织，LP=叶原基。a，c 和 e 比例尺为 1mm，b 和 d 比例尺为 20 μm，f 比例尺为 0.5mm。Fig.2-1 Morphological and histological observations of adventitious bud formation on SLSs of L.Oriental hybrid ‘Siberia’.Note: 9-(a, b), 12-(c, d) and 15- (e, f) day-old adventitious buds.AD apical dome, LP leaf primordium.Bars in a, c and e = 1mm, in b and d = 20μm, and in f = 0.5mm.2.4.3 SLSs 的超低温保存将 SLSs，在加载液中浸没 20 min，接着在 0°C 条件下，用 PVS2 脱水处理 4-9 h。将脱水处理后的 SLSs 转移到用铝箔制成的小皿之上（直径 7 cm），快速投入液氮之中，冻存 1h（+LN）。处理结束后，用镊子快速捞出带有 SLSs 的铝箔小皿，投入卸载液之中解冻及复温 20 min。将经过超低温处理的 SLSs 转移到 BM 培养基上，于培养间温度
【参考文献】：
期刊论文
[1]兰州百合粉营养成分及水分活度研究[J]. 吴霞明. 中国食物与营养. 2017(10)
[2]三种食用百合种质资源限制生长保存及遗传稳定性研究[J]. 万珠珠,牛来春,谭秀梅,刘敏,吴亮,董草. 北方园艺. 2016(13)
[3]百合种球脱毒技术研究进展[J]. 胡新颖,杨迎东,颜津宁,颜范悦. 江苏农业科学. 2014(04)
[4]卷丹百合脱毒快繁技术研究[J]. 周晓波,吴艺飞,丁茁荑. 中国农学通报. 2012(31)
[5]食用百合种质资源离体保存技术研究[J]. 张玉芹,李锡香,王海平. 北方园艺. 2011(02)
[6]食用百合试管苗缓慢生长保存的研究[J]. 张玉芹,冯建军,赵景芳. 中国蔬菜. 2010(24)
[7]茎尖培养及热处理技术在百合脱毒中的应用研究[J]. 高慧卿,樊兰瑛,王秀红,高宏樟. 山西农业大学学报(自然科学版). 2010(06)
[8]百合的脱病毒、快速繁殖技术的研究[J]. 邵增龙,高山林,黄和平,嵇恂,马莉. 药物生物技术. 2010(03)
[9]东方百合快繁培养基优化与脱毒技术研究[J]. 钟海丰,黄宇翔,邓朝生,江斌. 中国农学通报. 2009(17)
[10]食用百合脱毒快繁技术研究[J]. 陈丽,唐寅,张承妹,董举文,宋学孟. 上海农业学报. 2009(02)
博士论文
[1]葡萄茎尖超低温保存及超低温疗法脱毒研究[D]. 毕文璐.西北农林科技大学 2017
硕士论文
[1]东方百合病毒检测与茎尖超低温脱毒研究[D]. 靳慧洁.福建农林大学 2009
[2]中国野生百合资源调查及遗传多样性分析[D]. 王洁琼.北京林业大学 2006
本文编号：3563282
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