菊花CmMYBs基因克隆及其抗蚜性功能鉴定
发布时间：2022-01-02 22:40
菊花（Chrysanthemum morifolium Ramat.）原产我国,是世界四大切花与我国十大名花之一,观赏与经济价值极高。蚜虫是菊花最重要的害虫,严重影响菊花的产量与品质。目前,蚜虫防治多采用化学方法,不仅消耗了大量人力物力、,对环境造成污染,而且农药的残留使得蚜虫群体产生抗药性。蚜虫的防治已成为菊花生产中的一大难题。MYB转录因子功能众多,参与到植物的各种生命活动中,已有报道MYB转录因子参与植株抗蚜虫过程中的调节。然而在菊花中,关于MYB基因抗蚜性的研究尚未见报道。本文从菊花中克隆得到了两个MYB基因CmMYB58.1、CmMYB58.2,并对其表达特性、转录激活活性及亚细胞定位等进行了研究;通过农杆菌介导的叶盘转化法将其转化菊花’神马’,获得了超表达植株,并对其抗蚜性进行了鉴定;通过对转基因株系的木质素合成相关基因表达量的分析,初步探究了 MYB基因的抗蚜性机制。主要研究结果如下:1.采用RT-PCR和RACE-PCR技术,从菊花中克隆得到2个菊花MYB基因CmMYB58.和 CmMYB58.2。经序列分析,CmMYB58.1基因的 ORF 为 753bp,编码251...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]植物MYB转录因子调控苯丙烷类生物合成研究[J]. 穆红梅,杜秀菊,张秀省,张敏,曹兴. 北方园艺. 2015(24)
[2]蚜虫诱导的植物免疫反应[J]. 袁亮,郭慧娟,孙玉诚,肖铁光,戈峰. 应用昆虫学报. 2015(01)
[3]MYB类转录因子对花药和花粉发育的调控途径[J]. 邓志刚,金樑,李晶,王文斌,杨龙,王晓娟. 西北植物学报. 2013(04)
[4]玉米R2R3型MYB转录因子家族生物学功能综述[J]. 戴毅,高莹莹,黄泽峰,陈云,高勇. 江苏农业科学. 2013(03)
[5]植物转录因子最新研究方法[J]. 王传琦,孔稳稳,李晶. 生物技术通讯. 2013(01)
[6]植物MYB转录因子功能及调控机制研究进展[J]. 左然,徐美玲,柴国华,周功克. 生命科学. 2012(10)
[7]韧皮部取食昆虫诱导的植物防御反应[J]. 张海静,严盈,彭露,郭建洋,万方浩. 昆虫学报. 2012(06)
[8]植物次生生长相关MYB转录因子研究进展[J]. 薛英喜,魏建华,姜廷波,王宏芝. 安徽农业科学. 2012(13)
[9]植物MYB转录因子研究[J]. 刘守梅,孙玉强,王慧中. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2012(02)
[10]抗蚜基因工程研究进展[J]. 苗猛猛,王旭静,唐巧玲,王志兴. 生物技术进展. 2012(02)
硕士论文
[1]切花菊蚜虫抗性鉴定与机理探讨及LLA转基因研究[D]. 何俊平.南京农业大学 2010
本文编号：3565017
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２木质素生物合成途径（Ｚｈａｏ?ｅｔａｌ，?２０１１）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｌｉｇｎｉｎ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?（Ｚｈａｏ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??
的ｃＤＮＡ全长序列，用全长引物和高保真酶进行ＰＣＲ，亚克隆测序以保证序列信息的??真实性。根据全长序列用软件分析出最大开放阅读框ＯＲＦ序列，并设计ＯＲＦ引物（表??２－１）进行ＰＣＲ反应，分别得到７５３ｂｐ和６００ｂｐ的片段（图２－１Ａ２，Ｂ２），经测序再??次验证，从而获取了目的基因的全长和ＯＲＦ序列信息。??７５０ｂｐ??Ｉ?Ｉ?５Ｄ０ｂｐ?５００ｂｐ?Ｉ??图２－１菊花ＣｗＭｒａＪＳ．／和基因的ＰＣＲ扩增??Ａ１：?Ｃ：ｍｙＶ／ｒ／ｉ兄．／?中间?Ｊ?ｉ?段；八２：?Ｃ：ｍＡ／ｒ／Ｕ况?／?〇ｍ：??Ｂｌ：?中间厂丨？段；Ｂ２：?ＣｍＡ／＞７ｉ５５．２０ＲＦ??Ｍ：?２００（Ｈ）ＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１：?Ｈ?标片段??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣｍＭＹＢ５８．１?ａｎｄ?ＣｍＭＹＢ５８．２??Ａ１：?Ｔｈｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ＣＶｗＡ／ＫＺ＾Ｓ．?／；?Ａ２：?Ｔｈｅ?ＯＲＦ?ｏｆ?ＯｗＡ／ｙＴＯＳ．?／??Ｂ１：?Ｔｈｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?２；?Ｂ２：?Ｔｈｅ?ＯＲＦ?ｏｆ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｉ?ｈｅ?ｏｂｊｅｃｔ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??２．２菊花ＣｍＭ７＾５＆／和基因序列分析及系统进化关系??２．２．１序列分析??将两个基因在?ＮＣＢＩ?（?Ｎａｔｉｏｎａｌ?Ｃｅｎｔｅｒ?ｏｆ?Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ?Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，??１９??
?２．２?ＣｍＭＫＳＪｃＳ．／和Ｃ：ｗＭ７５５＆２在不同组织器官中的表达分析??如图３－２所示，ＣＷＭＹＢ５＆７和ＯｎＭＦ５５＆２两个基因在菊花的根、茎和叶中都有??表达，且两个基因都是在叶片中表达量最高，在茎中的表达量次之，而在根中的表达??量最低。其中ＣｍＭ７５５＆／在叶片和茎中的表达量无明显差异，但明显高于根，而??在叶片中的表达量明显高于根和茎，表明和两??个基因在不同的组织器官中可能发挥着不同的作用。??９０??｜?８０?ＤＣｍＭＹＢ５８．１?□?ＣｍＭＹＢ５８．２?ｊ—ｆ—，??＾?７０??■ｉ?６０??Ｓ?５０??ｘ?４０??＾?３０?ｒ－＾－Ｗ??ｉ２０?－??Ｓ?１０??０?——１?１?一?－??Ｌ—Ｊ?１?Ｌ—１??ｒｏｏｔｓ?ｓｔｅｍｓ?ｌｅａｖｅｓ??图３－２?ＯｗＭｙＳ５Ｓ．７和ＣｗＭｒａＪＳＪ在菊花各组织中的表达模式??Ｆｉｇ．３－２?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ＣｍＭＹＢ５８．１?ａｎｄ?ＣｍＭＹＢ５８．２?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ??ｏｆ?ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ．??２．３转录激活活性和亚细胞定位分析??２．３．１?ｐＥＮＴＲｌＡ－ＣｗＭ７５兄Ｊ?载体的获得??设计含有酶切位点和別的引物，以含有目的片段的ｐＭＤ１９－Ｔ的质粒为??模板进行高保真扩增，扩增产物如图３－３?Ａ所示；用和勒〇／快切酶分别对入门??载体ｐＥＮＴＲｌ?Ａ和图３－３?Ａ中目的基因纯化回收产物进行双酶切，如图３－３?Ｂ所示；将??图３－３?Ｂ中的目的片段纯化回收后进行连接转化
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物MYB转录因子调控苯丙烷类生物合成研究[J]. 穆红梅,杜秀菊,张秀省,张敏,曹兴. 北方园艺. 2015(24)
[2]蚜虫诱导的植物免疫反应[J]. 袁亮,郭慧娟,孙玉诚,肖铁光,戈峰. 应用昆虫学报. 2015(01)
[3]MYB类转录因子对花药和花粉发育的调控途径[J]. 邓志刚,金樑,李晶,王文斌,杨龙,王晓娟. 西北植物学报. 2013(04)
[4]玉米R2R3型MYB转录因子家族生物学功能综述[J]. 戴毅,高莹莹,黄泽峰,陈云,高勇. 江苏农业科学. 2013(03)
[5]植物转录因子最新研究方法[J]. 王传琦,孔稳稳,李晶. 生物技术通讯. 2013(01)
[6]植物MYB转录因子功能及调控机制研究进展[J]. 左然,徐美玲,柴国华,周功克. 生命科学. 2012(10)
[7]韧皮部取食昆虫诱导的植物防御反应[J]. 张海静,严盈,彭露,郭建洋,万方浩. 昆虫学报. 2012(06)
[8]植物次生生长相关MYB转录因子研究进展[J]. 薛英喜,魏建华,姜廷波,王宏芝. 安徽农业科学. 2012(13)
[9]植物MYB转录因子研究[J]. 刘守梅,孙玉强,王慧中. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2012(02)
[10]抗蚜基因工程研究进展[J]. 苗猛猛,王旭静,唐巧玲,王志兴. 生物技术进展. 2012(02)
硕士论文
[1]切花菊蚜虫抗性鉴定与机理探讨及LLA转基因研究[D]. 何俊平.南京农业大学 2010
本文编号：3565017
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