PaMsrB1与PRSV-NIa-Pro间的氧化还原反应及PaMsrB1底物蛋白分离
发布时间：2022-01-09 17:20
番木瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRS V）是番木瓜种植业毁灭性病害。定位于叶绿体的蛋氨酸亚砜还原酶B1（MsrB1）能还原被活性氧（Reactive oxygen species,ROS）氧化蛋白中的Met,以保护植物光合代谢。前期证明PRSV多功能蛋白NIa-Pro与番木瓜MsrB1（PaMsrB1）互作干扰了PaMsrB1定位于叶绿体,从而影响PaMsrB1进入叶绿体还原修复被ROS氧化的蛋白质,造成叶绿体不能进行正常光合代谢,这可能是新的一种病毒反防御机制。由于PaMsrB1为蛋白还原酶,PRSV-NIa-Pro的氨基酸序列含有4个Met,为了进一步探究PRSV-NIa-Pro和PaMsrB1互作的生物学意义,本研究证实了PaMsrB1可以还原被氧化的PRSV-NIa-Pro,为解析这种PRSV-NIa-Pro与PaMsr B1互作干扰PaMsrB1正常定位于叶绿体的病毒反防御新机制提供科学依据。同时,为进一步深入了解PaMsrB1在病毒与寄主互作中PaMsrB1对叶绿体抗氧化防护机制,本研究应用亲和层析,纳升级液相色谱串联质谱联用技术（Nano L...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２：?ＰＲＳＶ－ＨＮ编码的聚合蛋白巧巧位点??Ｆｉｇ．?２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａ村ｏｎ?ｏｆ?ＰＲＳＶ－ＨＮ．??
ＰＲＳＶ－ＮＩａ－Ｐｒｏ基因与ｐＭＡＬｃ５ｘ载体经１／公ａｗ／／?Ｉ双酶切后连接，再转化到??大肠杆菌感受态ＴｒａｎｓｌＯ，涂到含Ａｍｐ?ＬＢ固体培养基上，待平板长出菌落，挑取单??菌落，ＷＮＩａ－Ｆ、ＮＩａ－民为引物进行菌液ＰＣＲ鉴定，结果显示（图７）均为阳性菌落。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７８９??２，０００－??１?０００－??６００－??２５０－??＂０－??Ｍ；?ＤＬ?２，０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１￣８：菌液?ＰＣＲ?结果；９；阳性对照。??Ｍ：ＤＬ?２，０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１?？８：?Ｐｒｏｄｕｃ化?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣ民；９：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??图７：重组质粒ｐＭＡ＾ｃ５ｘ－ＮＰ的菌液ＰＣＲ鉴定??Ｆｉｇ?．７?：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ行ｏｎ?ｏｆ?ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｂｙ?ｂａｃ化ｒｉａ?ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣＲ??把阳性菌株加入穿刺管，送到生工生物工程（上海）有限公司进行测序，并提取??阳性菌质粒ｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ，对重组质粒进行Ｗｃｏｌ／公ｗｎ／／Ｉ双酶切鉴定，鉴定结果（图??８）和载体测序结果显示：ＰＲＳＶ－ＮＩａ－Ｐｒｏ基因片段正确的插入ｐＭＡＬｃ５ｘ载体的阅读??框架
０Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＮＩａ－Ｐｒｏ?扩增产物；２：?ｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ?ａｒｋｅｒ；ｌ：Ｔｈｅ?ＰＣ民?ｐｒｏ加ｃｔ?ｏｆＮＩａ－Ｐｒｏ；２：?ｐＭＡＪＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ?ｄｉ图８：重姐表达载体ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ的双酶ｉｇ．８：Ｄｉｇｅｓｔｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－］ＶＰ?ｖｅｃ化ｒ?ｗ化ｈ?ｉＶｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ转化到原核表达菌株感受态ｒｒａ、ＮＩａ－Ｒ为引物进行菌液ＰＣ民检现！１，结果显示：ｐｌＶＬＡＸ－ｄｘ－ＮＰ己成功转入原核表达菌株７ｈ１２３４?５６７
【参考文献】：
期刊论文
[1]四川白鹅CD4基因胞外去信号肽区的可溶性表达及纯化[J]. 程蓓蓓,陈舜,汪铭书,程安春. 四川动物. 2015(06)
[2]融合标签在蛋白质可溶性表达中的应用进展[J]. 吴珊珊,朱芸,陈珊珊,何冰芳. 化工进展. 2014(04)
[3]马铃薯Y病毒属病毒的细胞生物学研究进展[J]. 崔晓艳,魏太云,陈新. 中国农业科学. 2012(07)
[4]鸡IL-2全基因和去信号肽基因的原核表达[J]. 龚婷,杨孝朴,李银聚,张春杰,吴庭才,程相朝. 甘肃农业大学学报. 2009(01)
[5]番木瓜环斑病毒海南分离株全基因组序列分析[J]. 卢雅薇,沈文涛,唐清杰,牛艳梅,周鹏. 病毒学报. 2008(02)
[6]我国选育的番木瓜品种介绍[J]. 刘德兵,曾晓鹏,陈子妹,陈金丽,陶亮,陈晓雪. 中国热带农业. 2007(01)
[7]马铃薯Y病毒属病毒基因功能研究进展[J]. 李向东,于晓庆,古勤生,刘金亮,竺晓平,郭兴启. 山东科学. 2006(03)
[8]一种新的研究蛋白相互作用的技术——串联亲和纯化[J]. 荆喆,黄尚志. 国外医学.遗传学分册. 2004(03)
[9]番木瓜资源的开发利用与产业化发展[J]. 夏杏洲,胡雪琼. 热带农业科学. 2002(04)
[10]凝集素亲和层析分析血清GGT寡糖链结构[J]. 王念跃,王惠民,李鹤林,方之勋,王永志,杨成保,张永臣,常伟. 陕西医学检验. 2001(03)
硕士论文
[1]P型番木瓜环斑病毒海南分离物（PRSV-P HN-2）全长cDNA侵染性克隆的构建与分析[D]. 庹德财.海南大学 2011
[2]番木瓜环斑病毒海南分离物（PRSV-HN）全基因组克隆与序列分析[D]. 卢雅薇.华南热带农业大学 2007
本文编号：3579132
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２：?ＰＲＳＶ－ＨＮ编码的聚合蛋白巧巧位点??Ｆｉｇ．?２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａ村ｏｎ?ｏｆ?ＰＲＳＶ－ＨＮ．??
ＰＲＳＶ－ＮＩａ－Ｐｒｏ基因与ｐＭＡＬｃ５ｘ载体经１／公ａｗ／／?Ｉ双酶切后连接，再转化到??大肠杆菌感受态ＴｒａｎｓｌＯ，涂到含Ａｍｐ?ＬＢ固体培养基上，待平板长出菌落，挑取单??菌落，ＷＮＩａ－Ｆ、ＮＩａ－民为引物进行菌液ＰＣＲ鉴定，结果显示（图７）均为阳性菌落。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７８９??２，０００－??１?０００－??６００－??２５０－??＂０－??Ｍ；?ＤＬ?２，０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１￣８：菌液?ＰＣＲ?结果；９；阳性对照。??Ｍ：ＤＬ?２，０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１?？８：?Ｐｒｏｄｕｃ化?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣ民；９：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??图７：重组质粒ｐＭＡ＾ｃ５ｘ－ＮＰ的菌液ＰＣＲ鉴定??Ｆｉｇ?．７?：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ行ｏｎ?ｏｆ?ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｂｙ?ｂａｃ化ｒｉａ?ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣＲ??把阳性菌株加入穿刺管，送到生工生物工程（上海）有限公司进行测序，并提取??阳性菌质粒ｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ，对重组质粒进行Ｗｃｏｌ／公ｗｎ／／Ｉ双酶切鉴定，鉴定结果（图??８）和载体测序结果显示：ＰＲＳＶ－ＮＩａ－Ｐｒｏ基因片段正确的插入ｐＭＡＬｃ５ｘ载体的阅读??框架
０Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＮＩａ－Ｐｒｏ?扩增产物；２：?ｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ?ａｒｋｅｒ；ｌ：Ｔｈｅ?ＰＣ民?ｐｒｏ加ｃｔ?ｏｆＮＩａ－Ｐｒｏ；２：?ｐＭＡＪＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ?ｄｉ图８：重姐表达载体ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ的双酶ｉｇ．８：Ｄｉｇｅｓｔｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－］ＶＰ?ｖｅｃ化ｒ?ｗ化ｈ?ｉＶｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ转化到原核表达菌株感受态ｒｒａ、ＮＩａ－Ｒ为引物进行菌液ＰＣ民检现！１，结果显示：ｐｌＶＬＡＸ－ｄｘ－ＮＰ己成功转入原核表达菌株７ｈ１２３４?５６７
【参考文献】：
期刊论文
[1]四川白鹅CD4基因胞外去信号肽区的可溶性表达及纯化[J]. 程蓓蓓,陈舜,汪铭书,程安春. 四川动物. 2015(06)
[2]融合标签在蛋白质可溶性表达中的应用进展[J]. 吴珊珊,朱芸,陈珊珊,何冰芳. 化工进展. 2014(04)
[3]马铃薯Y病毒属病毒的细胞生物学研究进展[J]. 崔晓艳,魏太云,陈新. 中国农业科学. 2012(07)
[4]鸡IL-2全基因和去信号肽基因的原核表达[J]. 龚婷,杨孝朴,李银聚,张春杰,吴庭才,程相朝. 甘肃农业大学学报. 2009(01)
[5]番木瓜环斑病毒海南分离株全基因组序列分析[J]. 卢雅薇,沈文涛,唐清杰,牛艳梅,周鹏. 病毒学报. 2008(02)
[6]我国选育的番木瓜品种介绍[J]. 刘德兵,曾晓鹏,陈子妹,陈金丽,陶亮,陈晓雪. 中国热带农业. 2007(01)
[7]马铃薯Y病毒属病毒基因功能研究进展[J]. 李向东,于晓庆,古勤生,刘金亮,竺晓平,郭兴启. 山东科学. 2006(03)
[8]一种新的研究蛋白相互作用的技术——串联亲和纯化[J]. 荆喆,黄尚志. 国外医学.遗传学分册. 2004(03)
[9]番木瓜资源的开发利用与产业化发展[J]. 夏杏洲,胡雪琼. 热带农业科学. 2002(04)
[10]凝集素亲和层析分析血清GGT寡糖链结构[J]. 王念跃,王惠民,李鹤林,方之勋,王永志,杨成保,张永臣,常伟. 陕西医学检验. 2001(03)
硕士论文
[1]P型番木瓜环斑病毒海南分离物（PRSV-P HN-2）全长cDNA侵染性克隆的构建与分析[D]. 庹德财.海南大学 2011
[2]番木瓜环斑病毒海南分离物（PRSV-HN）全基因组克隆与序列分析[D]. 卢雅薇.华南热带农业大学 2007
本文编号：3579132
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3579132.html
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