细叶百合2型金属硫蛋白（LpMT2）基因的克隆及其功能解析

发布时间：2022-01-12 06:28

　　细叶百合（Lilium pumilum）是百合科（Liliaceae）百合属（Lilium）多年生球根花卉,具有很高的观赏价值和很强的抗逆性,可作为百合抗性育种的重要亲本,但关于细叶百合抗性基因的研究少见报导;金属硫蛋白（metallothionein,简称MT）是一类富含半胱氨酸和金属离子的非酶类蛋白质,与植物抗盐碱胁迫、抗氧化胁迫以及清除自由基等机制有关。本研究以细叶百合叶片的cDNA为模版,采用PCR技术克隆得到一段长234bp,编码77个氨基酸的MT2基因读码框序列,命名为LpMT2,通过实时荧光定量PCR（QRT-PCR）技术分析了其表达模式。构建了 pBI121-LpMT2植物表达载体并成功转化到细叶百合中,对过表达LpMT2细叶百合的抗逆性进行了进一步解析,主要研究结果如下:（1）从细叶百合中分离的LpMT2基因编码蛋白具有Metallothio₂结构域,属于Metallothio₂超家族。氨基酸对比结果显示,LpMT2与铁皮石斛DcMT2、中华猕猴桃（原变种）AcMT2、大豆GmMT2以及拟南芥AtMT2a具有较高的同源性,推... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１细叶百合叶片总ＲＮＡ??

綱??ｔｏｏ??图２－２?Ｚ＾ＭＴ２基因ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增结果??Ｍ：?ＤＭ２０００?ｍａｒｋｅｒ：?１：细叶百合／基因??Ｆｉｇ．?２－２?ＬｐＭＴ２?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ２０００；?１：?ｃＤＮＡ?ｏｆ?ＬｐＭＴ２?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｌ．?ｐｕｍｉｌｕｍ??２．３．１．２阳性克隆的筛选与鉴定??利用ＰＣＲ扩增反应对过夜培养的大肠杆菌单克隆进行验证，用凝胶电泳对其产物??进行检测，结果如图２－３。将条带位置正确的菌液送至生物公司测序，将序列比对正确??的菌液保存至－８０°Ｃ备用。??＿??，＜＞〇??图２－３?Ｚ／＾／７２基因阳性克隆检测??Ｍ：ＤＭ２０００?ｍａｒｋｅｒ；?１，２？？细叶百合?基因??Ｆｉｇ．２－３?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬｐＭＴ２?ｇｅｎｅ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｌｏｎｅｓ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ２０００；?１，２：?ｃＤＮＡ?ｏｆ?ＬｐＭＴ２?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｌ．?ｐｕｍｉｌｕｍ??－１４－??

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本文编号：3584281