香菇中α-半乳糖苷酶的研究

发布时间：2022-01-25 02:37

　　α-半乳糖苷酶,具有催化α-1,6-键结合的末端半乳糖残基类物质水解的作用。近年来,随着对α-半乳糖苷酶研究的深入,逐渐将其应用于医学、食品和饲料等工业中。本研究从香菇子实体中首次分离纯化出该酶,并深入研究了其理化性质,同时优化了香菇发酵产酶工艺。以香菇子实体为材料,通过离子交换层析和凝胶过滤层析,得到一种单亚基α-半乳糖苷酶LEGI,纯化倍数为1051倍,纯化后酶的比活为168U/mg,分子量为48kDa。该酶在酸性和常温条件下具有良好的稳定性,最适pH和最适温度分别为5.0和60℃。SDS、EDTA、Hg2+、Ag+、Fe3+、Cd2+对 LEGI 有强烈抑制作用,而 Cu2+对 LEGI 有促进。DTT对LEGI活力有显著的提高,化学修饰剂NBS对LEGI有显著的抑制作用,表明色氨酸是LEGI活性中心的必需基团,且LEGI活性中心附近有二硫键。LEGI具有抵抗胃蛋白酶、酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶的水解特性。在动力学试验中,LEGI对底物pNPG、水苏糖、棉子糖、蜜二糖的Km值分别为1.08mM、17.24mM、13.80mM、8.05mM,并且在试验中发现,半乳糖和蜜二糖对LEGI的... 

【文章来源】：山西农业大学山西省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１新鲜的香菇子实体（摄于太谷）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｆｒｅｓｈ?ｂｏｄｙ?ｏｆ?Ｌｅｎｄｎｕｌａ?ｅｄｏｄｅｓ?（ｐｈｏｔｏｅｄ?ｉｎ?Ｔａｉｇｕ）??

ＬＥＧＩ可以牢固的吸附在ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阴离子柱上，缓冲液和５０?ｍＭ?ＮａＣｌ??洗脱可以去除杂蛋白组分Ｄ１和Ｄ２，?２５０?ｍＭ?ＮａＣｌ可以将活性组分洗脱下来（Ｄ３和Ｄ４??组分），其中大部分活性主要集中于Ｄ３，?Ｄ４组分活性较低且杂蛋白较多，５００ｍＭＮａＣｌ??和１?Ｍ?ＮａＣｌ洗脱下较大量的杂蛋白组分Ｄ５和Ｄ６。将Ｄ３活性较高的组分合并收集，??并用蒸馏水充分透析。??３?ｒ：?７??

图２－３香薇ａ－半乳糖苷酶Ｄ３组分的ＣＭ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阳离子又换层析（ｐＨ?４．６）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?Ｄ３?ｏｎ?ＣＭ－?

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]榆黄蘑、红平菇和双孢菇子实体中α-半乳糖苷酶理化性质的研究[D]. 胡玉净.中国农业大学 2016
[2]α-半乳糖苷酶碳源诱导机制研究及复合酶制剂的开发[D]. 顾丰颖.浙江大学 2013

硕士论文
[1]香菇柄多肽的制备及其抗氧化活性研究[D]. 张璐.扬州大学 2017
[2]黄瓜6种α-半乳糖苷酶生理功能初步研究[D]. 杨霞光.扬州大学 2012
[3]α-半乳糖苷酶高产菌株的筛选及其基因的克隆、表达、纯化和性质研究[D]. 贲培培.南京农业大学 2011



本文编号：3607747