F-box蛋白SlAMR1调控番茄抗坏血酸合成的机理研究
发布时间：2022-07-08 13:22
植物总是会受到非生物和生物胁迫的伤害,胁迫环境不利于它们的生长发育。抗坏血酸是植物体内重要的抗氧化剂,通过清除逆境产生的过量ROS,在植物抵抗逆境所造成的损害中发挥着至关重要的作用。抗坏血酸对人体也有着非常重要的作用,且人体自身不能合成抗坏血酸,只能通过含抗坏血酸含量高的水果蔬菜获取。目前,对主要的模式作物如拟南芥、番茄等,研究人员对于抗坏血酸的合成代谢研究已经取得很大进展,抗坏血酸在高等植物中的合成途径已经基本确定,但是关于调控因子影响植物抗坏血酸含量方面进展较少。前人报道拟南芥中AMR1调控因子对叶片抗坏血酸合成有负调控作用,但调控机制尚不明确。本文根据拟南芥中抗坏血酸调控因子AtAMR1的番茄同源基因SlAMR1,研究其对番茄浆果中抗坏血酸合成代谢的调控机制,具有一定的科学意义和重要的应用价值。AMR1最早是在拟南芥中发现的第一个抗坏血酸调控因子,特异地在D-Man/L-Gal途径中发挥着重要作用。本实验是拟南芥中AMR1为信息探针,在番茄Unigene数据库中搜索同源性最高且具有相同保守结构域的Unigene命名为SlAMR1。在番茄中对SlAMR1做转基因功能验证,并从生理生...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 植物抗坏血酸的研究进展
1.2.1 抗坏血酸的生理功能
1.2.2 抗坏血酸在植物中的生物合成途径
1.2.3 植物体内抗坏血酸的氧化
1.2.4 植物体内抗坏血酸的循环再生
1.2.5 抗坏血酸的转运
1.2.6 植物体内抗坏血酸合成的调控
1.3 F-box蛋白研究进展
1.3.1 F-box蛋白与泛素蛋白酶体途径
1.3.2 F-box在植物生长发育过程中的作用
2 材料与方法
2.1 植物材料
2.2 主要试剂、菌株及载体
2.3 实验方法
2.3.1 番茄抗坏血酸含量测定分析
2.3.2 转基因材料氧化处理
2.3.3 叶绿素含量测定
2.3.4 丙二醛(MDA)含量测定
2.3.5 DAB染色
2.3.6 番茄叶片H2O2荧光染色鉴定
2.3.7 抗坏血酸合成途径底物饲喂处理番茄叶片
2.3.8 抗坏血酸合成途径底物饲喂处理番茄果实
2.3.9 GMP酶活测量
2.3.10 GalUR酶活测定
3 结果与分析
3.1 F-box蛋白家族的系统进化分析
3.2 F-box蛋白SlAMR1转基因材料叶片抗坏血酸含量分析
3.3 SlAMR1转基因材料果实中抗坏血酸含量及基因表达量分析
3.4 SlAMR1转基因材料对光周期的响应
3.5 转基因材料的氧化胁迫反应
3.6 转基因材料活性氧水平鉴定
3.7 AsA合成途径底物饲喂处理转基因材料叶片
3.8 AsA合成途径底物饲喂处理转基因材料果实
3.9 叶片中GMP酶活测定
3.10 叶片中GalUR酶活测定
3.11 泛素蛋白的Western检测
3.12 SlAMR1互作基因表达量测定
4 讨论与展望
4.1 讨论
4.2 后续工作展望
参考文献
附录
附录一 DNA提取
附录二 RNA提取和反转录
附录三 实时荧光定量PCR分析
附录四 Western Blot
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]EMS诱变的‘里格尔87-5’番茄M2群体突变体表型及其抗坏血酸研究[J]. 刘根忠,王云飞,孟祥飞,张余洋,叶志彪. 园艺学报. 2017(01)
[2]番茄抗坏血酸合成代谢研究进展[J]. 张凤霞,陶佩文,李汉霞,叶志彪,张余洋. 中国蔬菜. 2016(01)
[3]Reduction of methylviologen-mediated oxidative stress tolerance in antisense transgenic tobacco seedlings through restricted expression of StAPX[J]. Wei-hong SUN,Yong WANG,Hua-gang HE,Xue LI,Wan SONG,Bin DU,Qing-wei MENG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine ＆ Biotechnology）. 2013(07)
博士论文
[1]番茄Dof基因家族全基因组分析及SlDof22、SlDHAR1和FaGalUR在AsA积累中的功能分析[D]. 蔡晓锋.华中农业大学 2014
硕士论文
[1]番茄抗坏血酸生物合成酶GME和MIOX的功能分析[D]. 刘军霞.华中农业大学 2009
本文编号：3657106
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 植物抗坏血酸的研究进展
1.2.1 抗坏血酸的生理功能
1.2.2 抗坏血酸在植物中的生物合成途径
1.2.3 植物体内抗坏血酸的氧化
1.2.4 植物体内抗坏血酸的循环再生
1.2.5 抗坏血酸的转运
1.2.6 植物体内抗坏血酸合成的调控
1.3 F-box蛋白研究进展
1.3.1 F-box蛋白与泛素蛋白酶体途径
1.3.2 F-box在植物生长发育过程中的作用
2 材料与方法
2.1 植物材料
2.2 主要试剂、菌株及载体
2.3 实验方法
2.3.1 番茄抗坏血酸含量测定分析
2.3.2 转基因材料氧化处理
2.3.3 叶绿素含量测定
2.3.4 丙二醛(MDA)含量测定
2.3.5 DAB染色
2.3.6 番茄叶片H2O2荧光染色鉴定
2.3.7 抗坏血酸合成途径底物饲喂处理番茄叶片
2.3.8 抗坏血酸合成途径底物饲喂处理番茄果实
2.3.9 GMP酶活测量
2.3.10 GalUR酶活测定
3 结果与分析
3.1 F-box蛋白家族的系统进化分析
3.2 F-box蛋白SlAMR1转基因材料叶片抗坏血酸含量分析
3.3 SlAMR1转基因材料果实中抗坏血酸含量及基因表达量分析
3.4 SlAMR1转基因材料对光周期的响应
3.5 转基因材料的氧化胁迫反应
3.6 转基因材料活性氧水平鉴定
3.7 AsA合成途径底物饲喂处理转基因材料叶片
3.8 AsA合成途径底物饲喂处理转基因材料果实
3.9 叶片中GMP酶活测定
3.10 叶片中GalUR酶活测定
3.11 泛素蛋白的Western检测
3.12 SlAMR1互作基因表达量测定
4 讨论与展望
4.1 讨论
4.2 后续工作展望
参考文献
附录
附录一 DNA提取
附录二 RNA提取和反转录
附录三 实时荧光定量PCR分析
附录四 Western Blot
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]EMS诱变的‘里格尔87-5’番茄M2群体突变体表型及其抗坏血酸研究[J]. 刘根忠,王云飞,孟祥飞,张余洋,叶志彪. 园艺学报. 2017(01)
[2]番茄抗坏血酸合成代谢研究进展[J]. 张凤霞,陶佩文,李汉霞,叶志彪,张余洋. 中国蔬菜. 2016(01)
[3]Reduction of methylviologen-mediated oxidative stress tolerance in antisense transgenic tobacco seedlings through restricted expression of StAPX[J]. Wei-hong SUN,Yong WANG,Hua-gang HE,Xue LI,Wan SONG,Bin DU,Qing-wei MENG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine ＆ Biotechnology）. 2013(07)
博士论文
[1]番茄Dof基因家族全基因组分析及SlDof22、SlDHAR1和FaGalUR在AsA积累中的功能分析[D]. 蔡晓锋.华中农业大学 2014
硕士论文
[1]番茄抗坏血酸生物合成酶GME和MIOX的功能分析[D]. 刘军霞.华中农业大学 2009
本文编号：3657106
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3657106.html
