山东省辣椒病毒病病原分子鉴定及辣椒脉黄化病毒全基因组序列分析

发布时间：2022-10-20 16:55

　　辣椒是山东省主要种植蔬菜之一。近年来,随着辣椒种植面积的增加,辣椒病毒病的危害日益严重,多呈现复合性侵染,严重影响辣椒的生产,已成为制约山东省辣椒产量和品质的主要因素。本研究以分子生物学技术为基础,对山东省10个辣椒种植区域进行15种病毒病病原的检测与鉴定,基本摸清山东省各辣椒产区病毒病发生情况以及主次关系,以及病毒复合侵染情况,同时对辣椒脉黄化病毒（Pepper vein yellows virus,PeVYV）山东分离物进行全基因组序列的克隆与分析,并结合不同地区的PeVYV分离物,对PeVYV进行系统发育分析。主要结论如下:1.利用15种病毒特异性引物检测253份辣椒样品,检测到14种病毒病原,病原种类有:PMMo V、CMV、TMGMV、BBWV、BWYV、TMV、ToMV、TYLCV、PVY、MABYV、CABYV、PeVYV、AMV和ChiVMV,CaCV未检测到。国内首次报道的辣椒病毒病原为BWYV、MABYV、CABYV和PeVYV。2.253份样品病毒检出率达96.0%,在所检出的辣椒病毒病病原中,PMMo V与CMV的检出率最高,分别为61.6%、60.0%,是危害... 

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要 Abstract 1 前言
1.1 辣椒病毒病病原种类及危害简介
    1.1.1 马铃薯卷叶病毒属
    
1.1.1.1 辣椒脉黄化病毒
    
1.1.1.2 甜菜西方黄化病毒
    
1.1.1.3 葫芦蚜传黄化病毒
    1.1.2 烟草轻型绿花叶病毒
    1.1.3 蚕豆萎蔫病毒
    1.1.4 番茄黄化曲叶病毒
1.2 辣椒病毒病的防治措施
1.3 辣椒病毒病的检测技术研究概况
    1.3.1 生物学检测法
    1.3.2 血清学方法
    1.3.3 分子生物学方法
1.4 本研究的目的与意义 2 材料与方法
2.1 实验材料与仪器
    2.1.1 病毒样品的采集
    2.1.2 实验试剂
    2.1.3 实验所需仪器
    2.1.4 实验试剂的配制方法
2.2 辣椒病毒病中RNA病毒的检测鉴定
    2.2.1 样品RNA提取
    2.2.2 相关引物设计
    2.2.3 反转录cDNA的合成
    2.2.4 PCR扩增
    2.2.5 PCR产物的克隆和测序
    
2.2.5.1 琼脂糖凝胶电泳及DNA片段回收
    
2.2.5.2 连接载体
    
2.2.5.3 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备
    
2.2.5.4 连接产物转化至大肠杆菌DH5α
    
2.2.5.5 提取质粒DNA
    
2.2.5.6 重组克隆质粒的PCR鉴定
    2.2.6 序列分析
2.3 辣椒病毒病中双生病毒的检测与鉴定
    2.3.1 样品DNA提取
    2.3.2 引物的合成
    2.3.3 双生病毒的RCR扩增
    2.3.4 PCR产物的克隆及测序
    2.3.5 序列分析
2.4 辣椒脉黄化病毒全基因组的PCR扩增
    2.4.1 样品RNA提取
    2.4.2 引物的设计与合成
    2.4.3 反转录cDNA的合成
    2.4.4 全基因组PCR扩增
    2.4.5 PCR产物的克隆及测序
    2.4.6 序列分析 3 结果与分析
3.1 山东省侵染辣椒的RNA病毒病病原检测结果
    3.1.1 山东省侵染辣椒的RNA病毒种类检测结果
    3.1.2 山东省侵染辣椒的RNA病毒病检出率
    3.1.3 山东省各地辣椒病毒病分布情况
3.2 山东省侵染辣椒的双生病毒检测结果
3.3 山东省辣椒病毒病复合侵染情况
3.4 辣椒脉黄化病毒山东分离物（PeVYV-SD）全基因组扩增及序列分析
    3.4.1 辣椒脉黄化病毒山东分离物全长扩增
    3.4.2 辣椒脉黄化病毒山东分离物基因组结构分析
    3.4.3 辣椒脉黄化病毒部分基因序列进化树分析 4 讨论
4.1 山东省侵染辣椒的病毒病病原鉴定
4.2 辣椒病毒病复合侵染
4.3 辣椒脉黄化病毒全基因序列分析 5 结论 参考文献 致谢 攻读硕士学位期间发表论文



本文编号：3694936