蝴蝶兰再生体系建立及转蓝色形成基因研究

发布时间：2022-12-05 20:34

　　蝴蝶兰（Phalaenopsis aphrodite）由于基因资源的限制,缺乏蓝色系品种,运用分子手段,向蝴蝶兰导入外源基因使其获得新的花色素合成能力能够跨越该种植物基因库内基因类型的限制和由于种族隔离无法直接获得其他种植物蓝色形成基因的限制,为定向改良植物花色育种提供理论依据。本研究以蝴蝶兰‘大辣椒’为材料,将不同来源蓝色形成基因的植物表达载体构成不同组合瞬时转化蝴蝶兰,初步探索蓝色形成基因对蝴蝶兰花色的遗传调控并筛选出适合稳定转化的载体组合,构建植物稳定转化表达载体;同时研究了蝴蝶兰外植体取材、消毒方式、基本培养基、6-BA和NAA的配比及浓度对不定芽诱导、增殖、生根的影响,探索建立蝴蝶兰的再生繁殖体系,设置不同潮霉素浓度,筛选类原球茎最适选择压力。取得的结果如下:1.来自葡萄风信子的Ma DFR和Ma F3?5?H载体组合在瞬时转化蝴蝶兰后,花瓣颜色变深,进一步经花青苷含量测定结果显示转化后的花瓣花青苷含量是野生型的1.32倍,从而筛选出适合稳定转化的载体组合,即Ma DFR+Ma F3?5?H。2.构建了植物双元表达载体p CAMBIA1301-Ma DFR-Ma F3?5?H... 

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 引言
    1.2 植物呈色机制研究进展
        1.2.1 花青素生化和生物合成途径
        1.2.2 影响植物呈色的其他因素
    1.3 蓝色花育种研究进展
    1.4 蝴蝶兰组织培养研究进展
        1.4.1 蝴蝶兰花梗组织培养
        1.4.2 蝴蝶兰类原球茎组织培养
    1.5 蝴蝶兰转基因研究进展
    1.6 本研究的目的与意义
    1.7 技术路线
第二章 不同来源蓝色形成基因瞬时转化蝴蝶兰研究
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和载体
        2.1.3 试剂与仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 农杆菌介导瞬时转化蝴蝶兰
        2.2.2 表型观察
        2.2.3 花青苷总量测定
        2.2.4 细胞液pH测定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 瞬时转化蝴蝶兰表型观察
        2.3.2 花青苷总量测定
        2.3.3 细胞液pH测定
    2.4 小结
第三章 植物表达载体构建和蝴蝶兰再生体系建立研究
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株和载体
        3.1.3 试剂与仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 稳定转化植物双元表达载体构建
        3.2.2 蝴蝶兰再生体系建立及类原球茎抗性浓度筛选
    3.3 结果与分析
        3.3.1 载体构建示意图
        3.3.2 目的片段的扩增
        3.3.3 中间载体pCAMBIA1301-Ma F3?5?H的构建
        3.3.4 植物表达载体pCAMBIA1301-Ma DFR-Ma F3?5?H的构建
        3.3.5 蝴蝶兰外植体的选择
        3.3.6 消毒剂种类和消毒时间处理对外植体的影响
        3.3.7 基础培养基和6-BA、NAA对不定芽诱导的影响
        3.3.8 6 -BA、NAA对不定芽增殖的影响
        3.3.9 6 -BA、NAA对蝴蝶兰生根的影响
        3.3.10 类原球茎对潮霉素的敏感性
    3.4 小结
第四章 结论与展望
参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3710308