欧芹不同逆境条件下适宜内参基因的筛选
发布时间：2023-01-09 14:29
欧芹（Petroselinum crispum L.）,又名洋芫荽和法国香菜等,属于伞形科欧芹属一二年生草本植物。作为香辛蔬菜,食用嫩叶,鲜根、茎汁可供药用。非生物胁迫,包括温度（高温、低温）、盐害和干旱等,是导致欧芹减产的重要因素之一。分离欧芹相关的抗性基因,筛选与抗性性状紧密连锁的分子标记,对于欧芹抗逆品种的选育有重要的意义。qRT-PCR是定量基因转录水平的主要方法之一,需要使用内参基因（Reference gene）校正目标基因的表达量。本实验克隆了欧芹相关内参基因的部分片段,使用qRT-PCR技术建立每个基因相对应实时荧光定量的方法,研究了不同逆境条件下内参基因表达的稳定性。同时,为进一步验证在本研究中确定的内参基因,还对pcDREB1基因在欧芹高温胁迫下的表达谱进行了研究。具体研究结果如下:（1）以欧芹叶片cDNA为模板,筛选了 8条内参基因（GAPDH、ACTIN、eIF-4α、SAND、UBC、TIP41、EF-1α和TUB）的中间片段。与其他物种的同源基因进行BLAST比对,结果显示碱基相似度均在80%以上。（2）利用qRT-PCR技术建立了上述8条基因相对应的实时定...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
引言
第一章 文献综述
1.1 实时定量PCR介绍
1.1.1 实时定量PCR研究进展
1.1.2 实时定量PCR的一般应用
1.1.3 实时荧光定量PCR的使用标准
1.2 常用内参基因及其应用
1.3 植物与非生物胁迫
1.4 植物激素与胁迫
1.5 基因稳定性分析软件
1.5.1 geNorm
1.5.2 NormFinder
1.5.3 BestKeeper
1.6 欧芹内参基因筛选研究目的意义及技术路线
1.6.1 本研究目的及意义
1.6.2 本研究的技术路线
第二章 欧芹相关内参基因的克隆
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 实验方法
2.2 数据处理及分析
2.2.1 欧芹叶片cDNA合成及候选基因的克隆
2.2.2 候选内参基因的序列比对
2.2.3 欧芹候选内参基因特异引物设计及特异性检测
2.3 讨论
第三章 欧芹相关内参基因在不同胁迫下表达稳定性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 实验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 融解曲线结果分析
3.2.2 标准曲线
3.2.3 欧芹候选内参基因Cq值分析
3.2.4 内参基因在不同实验条件下的表达变化
3.2.5 内参基因的表达稳定性评价
3.3 欧芹候选内参基因的验证
3.4 讨论
3.4.1 评价欧芹内参基因表达的重要性
3.4.2 内参基因表达稳定性评价
总结与展望
创新之处
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物的环境信号分子茉莉酸及其生物学功能[J]. 李梦莎,阎秀峰. 生态学报. 2014(23)
[2]赤霉素调节植物对非生物逆境的耐性[J]. 杨东雷,董伟欣,张迎迎,何祖华. 中国科学:生命科学. 2013(12)
[3]提高植物抗寒性的机理研究进展[J]. 徐呈祥. 生态学报. 2012(24)
[4]高温胁迫下外源茉莉酸甲酯、钙和水杨酸对蝴蝶兰幼苗耐热性的影响[J]. 杨华庚,颜速亮,陈慧娟,杨重法,杨福孙,刘子凡. 中国农学通报. 2011(28)
[5]银耳α–微管蛋白基因的克隆及序列分析[J]. 董吉元,杨双熙,陈叶叶,刘娟,马爱民. 园艺学报. 2011(05)
[6]茶树实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择[J]. 孙美莲,王云生,杨冬青,韦朝领,高丽萍,夏涛,单育,骆洋. 植物学报. 2010(05)
[7]植物激素调控研究进展[J]. 熊国胜,李家洋,王永红. 科学通报. 2009(18)
[8]脱落酸在植物逆境胁迫研究中的进展[J]. 郝格格,孙忠富,张录强,杜克明. 中国农学通报. 2009(18)
[9]微生物源脱落酸（ABA）对辣椒苗耐冷性的影响[J]. 汤日圣,黄益洪,唐现洪,钟雨,余永柱,童红玉. 江苏农业学报. 2008(04)
[10]Suitable internal control genes for qRT-PCR normalization in cotton fiber development and somatic embryogenesis[J]. TU LiLi,ZHANG XianLong,LIU DiQiu,JIN ShuangXia,CAO JingLin,ZHU LongFu,DENG FengLin, TAN JiaFu ＆ ZHANG CunBin National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China. Chinese Science Bulletin. 2007(22)
硕士论文
[1]颠茄qPCR内参基因筛选及TRⅡ基因表达分析[D]. 李金弟.西南大学 2013
[2]GA3、6-BA和2，4-D在黄瓜种衣剂中的应用效应[D]. 杨文清.浙江大学 2006
本文编号：3729347
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
引言
第一章 文献综述
1.1 实时定量PCR介绍
1.1.1 实时定量PCR研究进展
1.1.2 实时定量PCR的一般应用
1.1.3 实时荧光定量PCR的使用标准
1.2 常用内参基因及其应用
1.3 植物与非生物胁迫
1.4 植物激素与胁迫
1.5 基因稳定性分析软件
1.5.1 geNorm
1.5.2 NormFinder
1.5.3 BestKeeper
1.6 欧芹内参基因筛选研究目的意义及技术路线
1.6.1 本研究目的及意义
1.6.2 本研究的技术路线
第二章 欧芹相关内参基因的克隆
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 实验方法
2.2 数据处理及分析
2.2.1 欧芹叶片cDNA合成及候选基因的克隆
2.2.2 候选内参基因的序列比对
2.2.3 欧芹候选内参基因特异引物设计及特异性检测
2.3 讨论
第三章 欧芹相关内参基因在不同胁迫下表达稳定性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 实验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 融解曲线结果分析
3.2.2 标准曲线
3.2.3 欧芹候选内参基因Cq值分析
3.2.4 内参基因在不同实验条件下的表达变化
3.2.5 内参基因的表达稳定性评价
3.3 欧芹候选内参基因的验证
3.4 讨论
3.4.1 评价欧芹内参基因表达的重要性
3.4.2 内参基因表达稳定性评价
总结与展望
创新之处
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物的环境信号分子茉莉酸及其生物学功能[J]. 李梦莎,阎秀峰. 生态学报. 2014(23)
[2]赤霉素调节植物对非生物逆境的耐性[J]. 杨东雷,董伟欣,张迎迎,何祖华. 中国科学:生命科学. 2013(12)
[3]提高植物抗寒性的机理研究进展[J]. 徐呈祥. 生态学报. 2012(24)
[4]高温胁迫下外源茉莉酸甲酯、钙和水杨酸对蝴蝶兰幼苗耐热性的影响[J]. 杨华庚,颜速亮,陈慧娟,杨重法,杨福孙,刘子凡. 中国农学通报. 2011(28)
[5]银耳α–微管蛋白基因的克隆及序列分析[J]. 董吉元,杨双熙,陈叶叶,刘娟,马爱民. 园艺学报. 2011(05)
[6]茶树实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择[J]. 孙美莲,王云生,杨冬青,韦朝领,高丽萍,夏涛,单育,骆洋. 植物学报. 2010(05)
[7]植物激素调控研究进展[J]. 熊国胜,李家洋,王永红. 科学通报. 2009(18)
[8]脱落酸在植物逆境胁迫研究中的进展[J]. 郝格格,孙忠富,张录强,杜克明. 中国农学通报. 2009(18)
[9]微生物源脱落酸（ABA）对辣椒苗耐冷性的影响[J]. 汤日圣,黄益洪,唐现洪,钟雨,余永柱,童红玉. 江苏农业学报. 2008(04)
[10]Suitable internal control genes for qRT-PCR normalization in cotton fiber development and somatic embryogenesis[J]. TU LiLi,ZHANG XianLong,LIU DiQiu,JIN ShuangXia,CAO JingLin,ZHU LongFu,DENG FengLin, TAN JiaFu ＆ ZHANG CunBin National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China. Chinese Science Bulletin. 2007(22)
硕士论文
[1]颠茄qPCR内参基因筛选及TRⅡ基因表达分析[D]. 李金弟.西南大学 2013
[2]GA3、6-BA和2，4-D在黄瓜种衣剂中的应用效应[D]. 杨文清.浙江大学 2006
本文编号：3729347
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3729347.html
