椭圆灰葡萄孢（Botrytis cinerea）胁迫下亚洲百合的生理响应及调节基因MAPK的克隆
发布时间：2023-03-05 17:09
百合灰霉病[Botrytis elliptica(Berk.)Cooke]俗称百合叶枯病,是严重影响百合生长发育的一种真菌性病害。椭圆灰葡萄孢(Botrytis cinerea)为百合灰霉病的病原菌,能够在中温高湿环境下迅速萌发并传播,严重阻碍百合集中规模化生产,造成巨大的经济损失。百合受到灰葡萄孢侵染后,多种生理指标发生变化。丝裂原活化蛋白酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是植物免疫系统的基本组成部分,与植物抵御抗真菌性病害密切相关。本试验以亚洲百合‘精粹’为试验材料,选择最佳分化、继代条件,建立离体快繁体系；测定该品种百合试管苗在灰霉病病原菌胁迫下发生的生理响应；并通过灰葡萄孢侵染,克隆得到一个与抗灰霉病有关的MAPK基因,同时对该基因进行生物信息学分析。研究的结果如下：(1)在亚洲百合‘精粹’离体快繁体系建立试验中,诱导鳞片分化的最适培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L；鳞片不定芽继代增殖培养最适培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L；促无菌苗生根结鳞茎最适培养基为1/2MS+蔗糖60...
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 百合离体快繁技术研究
1.1.1 外植体选择对百合组织培养的影响
1.1.2 培养基与激素对百合组织培养的影响
1.1.3 培养条件对百合组织培养的影响
1.1.4 其他方面对百合组织培养的影响
1.2 植物与病原菌互作中生理生化特性的影响
1.2.1 植物渗透调节物质与植物抗病的关系
1.2.2 植物保护酶系统与植物抗病的关系
1.2.3 病害胁迫对植物细胞膜系统的影响
1.3 百合灰霉病研究进展
1.4 MAPK在植物抗病中的防卫作用
1.4.1 MAPK信号级联系统
1.4.2 植物体MAPK的分类
1.4.3 植物中MAPKs功能
1.5 本课题研究的目的及意义
第二章 亚洲百合“精粹”离体再生快繁体系的建立
2.1 试验材料
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验仪器及用具
2.1.3 试验药品准备
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 设计方案
2.2.2 灭菌
2.2.3 外植体灭菌时间对建立无菌系的影响
2.2.4 不同接种部位对再生小鳞茎的影响
2.2.5 鳞茎放置方向对再生小鳞茎繁殖的影响
2.2.6 最适分化培养基的筛选
2.2.7 最适继代培养基的筛选
2.2.8 最适生根培养基的筛选
2.2.9 移栽
2.3 结果与分析
2.3.1 外植体灭菌时间对建立无菌系的影响
2.3.2 不同接种部位对再生小鳞茎的影响结果
2.3.3 鳞茎放置方向对再生小鳞茎繁殖的影响结果
2.3.4 最适分化培养基的筛选结果
2.3.5 最适继代培养基的筛选结果
2.3.6 最适生根培养基的筛选结果
2.3.7 移栽试验结果
2.4 讨论
第三章 椭圆灰葡萄孢胁迫下亚洲百合的生理响应
3.1 试验材料
3.1.1 供试材料
3.1.2 试验仪器及用具
3.1.3 试验药品准备
3.1.4 PDA培养基
3.2 试验方法
3.2.1 椭圆灰葡萄孢(灰霉病菌)培养
3.2.2 椭圆灰葡萄孢侵染供试材料
3.2.3 丙二醛(MDA)含量测定
3.2.4 过氧化物歧化酶(SOD)含量测定
3.2.5 过氧化物酶(POD)含量测定
3.2.6 多酚氧化酶(PPO)含量测定
3.2.7 苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量测定
3.2.8 可溶性蛋白含量测定
3.2.9 可溶性糖含量测定
3.3 试验结果
3.3.1 丙二醛(MDA)含量变化
3.3.2 过氧化物歧化酶(SOD)活性变化
3.3.3 过氧化物酶(POD)活性
3.3.4 多酚氧化酶(PPO)含量
3.3.5 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化
3.3.6 可溶性蛋白含量
3.3.7 可溶性糖含量
3.4 讨论
3.4.1 灰霉病对亚洲百合“精粹”试管苗质膜系统的影响
3.4.2 灰霉病对亚洲百合“精粹”试管苗渗透调节系统的影响
3.4.3 灰霉病对亚洲百合“精粹”试管苗酶保护系统的影响
第四章 亚洲百合抗灰霉MAPK基因克隆及序列分析
4.1 材料和方法
4.1.1 供试材料
4.1.2 试验仪器
4.1.3 试验药品
4.1.4 生物学软件
4.2 试验准备
4.2.1 前期准备及常用溶液配制
4.2.2 试验中引物设计
4.3 试验方法
4.3.1 总RNA提取
4.3.2 反转录合成第一链cDNA
4.3.3 MAPK基因保守区扩增
4.3.4 MAPK基因3’端序列扩增及测序
4.3.5 MAPK基因5’端序列扩增及测序
4.3.6 MAPK基因全长的扩增及测序
4.4 结果与分析
4.4.1 总RNA提取
4.4.2 MAPK中间保守区克隆
4.4.3 MAPK3’RACE克隆
4.4.4 MAPK5'RACE克隆
4.4.5 MAPK全长克隆
4.4.6 MAPK生物信息学分析
4.4.7 MAPK蛋白质结构预测
4.5 讨论
第五章 全文总结
5.1 亚洲百合“精粹”离体再生快繁体系的建立
5.2 椭圆灰葡萄孢胁迫下亚洲百合的生理响应
5.3 亚洲百合MAPK基因克隆
5.4 本试验后续研究
参考文献
附录
缩略词
致谢
本文编号：3756598
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 百合离体快繁技术研究
1.1.1 外植体选择对百合组织培养的影响
1.1.2 培养基与激素对百合组织培养的影响
1.1.3 培养条件对百合组织培养的影响
1.1.4 其他方面对百合组织培养的影响
1.2 植物与病原菌互作中生理生化特性的影响
1.2.1 植物渗透调节物质与植物抗病的关系
1.2.2 植物保护酶系统与植物抗病的关系
1.2.3 病害胁迫对植物细胞膜系统的影响
1.3 百合灰霉病研究进展
1.4 MAPK在植物抗病中的防卫作用
1.4.1 MAPK信号级联系统
1.4.2 植物体MAPK的分类
1.4.3 植物中MAPKs功能
1.5 本课题研究的目的及意义
第二章 亚洲百合“精粹”离体再生快繁体系的建立
2.1 试验材料
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验仪器及用具
2.1.3 试验药品准备
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 设计方案
2.2.2 灭菌
2.2.3 外植体灭菌时间对建立无菌系的影响
2.2.4 不同接种部位对再生小鳞茎的影响
2.2.5 鳞茎放置方向对再生小鳞茎繁殖的影响
2.2.6 最适分化培养基的筛选
2.2.7 最适继代培养基的筛选
2.2.8 最适生根培养基的筛选
2.2.9 移栽
2.3 结果与分析
2.3.1 外植体灭菌时间对建立无菌系的影响
2.3.2 不同接种部位对再生小鳞茎的影响结果
2.3.3 鳞茎放置方向对再生小鳞茎繁殖的影响结果
2.3.4 最适分化培养基的筛选结果
2.3.5 最适继代培养基的筛选结果
2.3.6 最适生根培养基的筛选结果
2.3.7 移栽试验结果
2.4 讨论
第三章 椭圆灰葡萄孢胁迫下亚洲百合的生理响应
3.1 试验材料
3.1.1 供试材料
3.1.2 试验仪器及用具
3.1.3 试验药品准备
3.1.4 PDA培养基
3.2 试验方法
3.2.1 椭圆灰葡萄孢(灰霉病菌)培养
3.2.2 椭圆灰葡萄孢侵染供试材料
3.2.3 丙二醛(MDA)含量测定
3.2.4 过氧化物歧化酶(SOD)含量测定
3.2.5 过氧化物酶(POD)含量测定
3.2.6 多酚氧化酶(PPO)含量测定
3.2.7 苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量测定
3.2.8 可溶性蛋白含量测定
3.2.9 可溶性糖含量测定
3.3 试验结果
3.3.1 丙二醛(MDA)含量变化
3.3.2 过氧化物歧化酶(SOD)活性变化
3.3.3 过氧化物酶(POD)活性
3.3.4 多酚氧化酶(PPO)含量
3.3.5 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化
3.3.6 可溶性蛋白含量
3.3.7 可溶性糖含量
3.4 讨论
3.4.1 灰霉病对亚洲百合“精粹”试管苗质膜系统的影响
3.4.2 灰霉病对亚洲百合“精粹”试管苗渗透调节系统的影响
3.4.3 灰霉病对亚洲百合“精粹”试管苗酶保护系统的影响
第四章 亚洲百合抗灰霉MAPK基因克隆及序列分析
4.1 材料和方法
4.1.1 供试材料
4.1.2 试验仪器
4.1.3 试验药品
4.1.4 生物学软件
4.2 试验准备
4.2.1 前期准备及常用溶液配制
4.2.2 试验中引物设计
4.3 试验方法
4.3.1 总RNA提取
4.3.2 反转录合成第一链cDNA
4.3.3 MAPK基因保守区扩增
4.3.4 MAPK基因3’端序列扩增及测序
4.3.5 MAPK基因5’端序列扩增及测序
4.3.6 MAPK基因全长的扩增及测序
4.4 结果与分析
4.4.1 总RNA提取
4.4.2 MAPK中间保守区克隆
4.4.3 MAPK3’RACE克隆
4.4.4 MAPK5'RACE克隆
4.4.5 MAPK全长克隆
4.4.6 MAPK生物信息学分析
4.4.7 MAPK蛋白质结构预测
4.5 讨论
第五章 全文总结
5.1 亚洲百合“精粹”离体再生快繁体系的建立
5.2 椭圆灰葡萄孢胁迫下亚洲百合的生理响应
5.3 亚洲百合MAPK基因克隆
5.4 本试验后续研究
参考文献
附录
缩略词
致谢
本文编号：3756598
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