莲藕多酚氧化酶互作蛋白及功能分析
发布时间：2023-03-31 20:53
莲藕(Nelumbo nucifera Gaertn.)是中国用量较大的一种水生蔬菜,药食两用,其整个植株十个部位中有六个部位入药。莲藕具有很高的食用价值和药用价值,多酚氧化酶是植物中广泛存在的抗氧化酶,它同时也是导致莲藕等果蔬农产品采后褐变的重要原因。课题组前期通过酵母双杂的方法筛选出莲藕多酚氧化酶(Nn PPO1)与金鱼草素合成酶(Nn AUS)、半胱氨酸脱硫酶(Nn Cys)之间存在蛋白互作,但互作模式并不清楚,在此基础上,本研究进一步筛选、验证莲藕Nn PPO1与何蛋白互作,并明确它们的组织特异性表达和亚细胞定位,逐步探索Nn PPO1在莲藕中的作用机制,为精准抑制其活性奠定基础,对于采后控制莲藕褐变、延长其产业链具有重要意义。主要试验结果如下:1.本试验将抗坏血酸过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、半胱氨酸过氧化物酶、过氧化物酶等酶的基因序列,分别连接至p GADT7载体上,与课题组前期构建的JDPPO1-BD载体(Nn PPO1去除N端导肽部分所构载体)共转化酵母,以筛选互作蛋白,结果表明Nn PPO1与Nn CAT1之间存在互作关系,经过自激活和毒性试验表明,Nn C...
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 莲藕
1.1.1 莲藕简介
1.1.2 莲藕研究现状
1.2 多酚氧化酶研究进展
1.2.1 PPO分子结构的特点
1.2.2 PPO的分布与定位
1.2.3 PPO基因的多家族性
1.2.4 PPO基因的诱导
1.2.5 PPO的生理功能
1.3 金鱼草素合酶、半胱氨酸脱硫酶、过氧化氢酶的介绍
1.4 蛋白互作的技术
1.4.1 蛋白互作的主要技术
1.4.2 双分子荧光互补(BiFC)分析技术
1.5 研究的目的和意义
1.6 研究内容
1.6.1 莲藕NnPPO1互作蛋白的筛选
1.6.2 NnPPO1互作模式的分析
1.6.3 互作蛋白的亚细胞定位和组织特异性表达分析
1.6.4 生物信息学分析
第二章 通过酵母双杂交筛选NnPPO1的互作蛋白
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株与质粒
2.1.3 试验试剂
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 猎物载体的构建
2.2.2 NnPPO1互作蛋白的筛选
2.3 结果分析
2.3.1 目的基因的克隆及载体的构建
2.3.2 酵母双杂交筛选NnPPO1的互作蛋白
2.3.3 互作蛋白的毒性和自激活检测
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 NnPPO与 NnAUS、NnCys及 NnCAT1 互作分析
3.1 试验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株与质粒
3.1.3 试验试剂
3.1.4 培养基及浸染液的配制
3.2 试验方法
3.2.1 BIFC载体的构建
3.2.2 双分子荧光互补试验验证互作蛋白
3.2.3 Y2H分析NnPPO1与NnCAT1、NnAUS、NnCys互作位点
3.3 结果分析
3.3.1 BiFC验证蛋白互作的真实性
3.3.2 NnPPO1与NnCAT1、NnAUS、NnCys氨基酸序列的分析
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 互作蛋白的亚细胞定位与组织特异性表达
4.1 试验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌株与质粒
4.1.3 试验试剂
4.1.4 培养基及浸染液的配制
4.2 试验方法
4.2.1 互作蛋白的亚细胞定位
4.2.2 组织特异性表达分析
4.2.3 生物信息学分析内容
4.3 结果分析
4.3.1 互作蛋白的亚细胞定位
4.3.2 组织特异性表达分析
4.3.3 生物信息学分析结果
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论和创新点
5.1 结论
5.2 创新点
参考文献
附录
致谢
个人简介
本文编号：3775772
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 莲藕
1.1.1 莲藕简介
1.1.2 莲藕研究现状
1.2 多酚氧化酶研究进展
1.2.1 PPO分子结构的特点
1.2.2 PPO的分布与定位
1.2.3 PPO基因的多家族性
1.2.4 PPO基因的诱导
1.2.5 PPO的生理功能
1.3 金鱼草素合酶、半胱氨酸脱硫酶、过氧化氢酶的介绍
1.4 蛋白互作的技术
1.4.1 蛋白互作的主要技术
1.4.2 双分子荧光互补(BiFC)分析技术
1.5 研究的目的和意义
1.6 研究内容
1.6.1 莲藕NnPPO1互作蛋白的筛选
1.6.2 NnPPO1互作模式的分析
1.6.3 互作蛋白的亚细胞定位和组织特异性表达分析
1.6.4 生物信息学分析
第二章 通过酵母双杂交筛选NnPPO1的互作蛋白
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株与质粒
2.1.3 试验试剂
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 猎物载体的构建
2.2.2 NnPPO1互作蛋白的筛选
2.3 结果分析
2.3.1 目的基因的克隆及载体的构建
2.3.2 酵母双杂交筛选NnPPO1的互作蛋白
2.3.3 互作蛋白的毒性和自激活检测
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 NnPPO与 NnAUS、NnCys及 NnCAT1 互作分析
3.1 试验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株与质粒
3.1.3 试验试剂
3.1.4 培养基及浸染液的配制
3.2 试验方法
3.2.1 BIFC载体的构建
3.2.2 双分子荧光互补试验验证互作蛋白
3.2.3 Y2H分析NnPPO1与NnCAT1、NnAUS、NnCys互作位点
3.3 结果分析
3.3.1 BiFC验证蛋白互作的真实性
3.3.2 NnPPO1与NnCAT1、NnAUS、NnCys氨基酸序列的分析
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 互作蛋白的亚细胞定位与组织特异性表达
4.1 试验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌株与质粒
4.1.3 试验试剂
4.1.4 培养基及浸染液的配制
4.2 试验方法
4.2.1 互作蛋白的亚细胞定位
4.2.2 组织特异性表达分析
4.2.3 生物信息学分析内容
4.3 结果分析
4.3.1 互作蛋白的亚细胞定位
4.3.2 组织特异性表达分析
4.3.3 生物信息学分析结果
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论和创新点
5.1 结论
5.2 创新点
参考文献
附录
致谢
个人简介
本文编号：3775772
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