应用BAS1基因创制花期延长的矮牵牛新种质
发布时间：2023-04-03 23:58
光敏色素B激活标签的抑制蛋白1基因(phyB activation-tagged suppressor1 gene,BAS1)是油菜素内酯失活基因,其主要编码一个细胞色素P450,油菜素内酯失活基因过量表达会导致油菜素内酯碳26位羟基羟化,并且使本身的生物活性远低于正常油菜素内酯。该基因对植物体内活性油菜素内酯含量方面起着重要作用。很多花卉植物的花叶都会受到衰老的影响,而油菜素类是植物生长调节剂,调节植物的生长具有重要的作用。该研究以烟草?三星‘和矮牵牛?梦幻曲系列‘品种为材料,利用了衰老特异性启动子SAG12融合了BAS1基因,用根癌农杆菌介导的叶盘转化法将衰老特异启动子SAG12驱动BAS1基因在植物衰老时表达,延缓植物的衰老。为改善观赏植物的品质或创造新种质资源提供了一条新途径。取得以下研究结果:1.构建SAG12-BAS1植物表达载体及遗传转化烟草和矮牵牛本研究以pSH737为最初载体,克隆构建了SAG12启动子驱动BAS1基因表达元件、Kan+为筛选标记基因的植物表达载体pSH737-SAG12-BAS1。酶切及PCR验证后将其导入根癌农杆菌LBA4404,采用叶盘遗传转化方...
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 植物激素与衰老的研究
1.1 植物衰老概念与衰老类型
1.2 植物衰老的诱导
1.3 叶片衰老的分子基础
1.3.1 叶片衰老相关基因的分类
1.3.2 叶片衰老相关基因的表达调控
2 矮牵牛研究概况
3 油菜素内酯的研究进展
3.1 油菜素内酯合成和代谢途径
3.2 油菜素内酯合成途径
3.3 油菜素内酯代谢途径
3.4 油菜素内酯的生理功能
3.4.1 细胞伸长与分裂
3.4.2 促进光合作用
3.4.3 调节衰老
3.4.4 逆境响应
3.5 油菜素内酯与其它植物激素之间的相互作用
3.5.1 油菜素内酯与生长素之间的关系
3.5.2 油菜素内酯与赤霉素之间的关系
3.5.3 油菜素内酯与细胞分裂素之间的关系
3.5.4 油菜素内酯与脱落酸之间的关系
3.5.5 油菜素内酯与乙烯之间的关系
4 花卉分子育种研究进展及存在的问题
5 研究目的和意义
第二章 转SAG12-BAS1基因烟草植株的获得
1 材料与方法
1.1 材料供试
1.2 实验试剂及仪器
1.2.1 主要试剂
1.2.2 主要仪器
1.3 主要溶液的配制
1.3.1 主要试剂的配制
1.3.2 主要培养基的配制
2 实验方法
2.1 植物表达载体构建
2.2 大肠杆菌感受态细胞制备
2.3 大肠杆菌的DNA转化
2.4 质粒DNA提取
2.5 农杆菌感受态细胞制备
2.6 农杆菌的DNA转化
2.7 农杆菌菌液PCR鉴定
2.8 菌种保存
2.9 遗传转化
2.9.1 农杆菌活化与培养
2.9.2 农杆菌介导的烟草遗传转化
2.9.3 抗性芽筛选和生根
2.9.4 烟草的炼苗与移栽
2.10 转基因植株GUS组织化学染色
2.11 烟草植株DNA提取
2.12 烟草基因组DNA的PCR
2.13 生长观察试验
2.14 转基因烟草叶绿素含量测定和保护性酶活性的测定
2.14.1 叶绿素含量测定
2.14.2 烟草中SOD酶活和MDA含量的测定
2.15 植物激素含量测定
3 结果与分析
3.1 植物表达载体的获得
3.2 农杆菌介导的烟草遗传转化与转基因植株获得
3.3 植物表型及叶片衰老分析
3.4 转基因烟草理化指标测定和叶片衰老进程
3.5 烟草植株中细胞分裂素含量的测定
4 讨论
第三章转 基因矮牵牛的获得
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验试剂，仪器，主要溶液的配制(参考第三章：实验材料)
2 实验方法 (参考第三章：实验方法)
2.1 农杆菌介导的矮牵牛遗传转化
2.2 抗性芽筛选和生根
2.3 矮牵牛的炼苗与移栽
2.4 转基因植株GUS组织化学染色(参考第三章：烟草组织化学染色)
2.5 矮牵牛植株DNA提取
2.6 矮牵牛基因组DNA的PCR鉴定
2.7 叶片的离体培养及花朵寿命的检测
2.8 叶绿素含量测定及可溶性糖测定
2.9 SOD、POD和CAT酶活性测定及MDA含量测定：
2.10 矮牵牛衰老相关基因表达分析
2.10.1 矮牵牛叶及花中提取总RNA
2.10.2 cDNA第一链合成
2.10.3 Real time-PCR反应
3 结果分析
3.1 农杆菌介导的矮牵牛遗传转化与转基因植株获得
3.2 矮牵牛植物表型及叶片衰老分析
3.3 转基因矮牵牛理化指标测定和叶片衰老进程
3.4 转BAS1基因对植物衰老相关基因表达的影响
4 讨论
第四章 结论、创新与展望
1 研究结论
(1)转基因烟草
(2)转基因矮牵牛
2 研究创新
3 研究展望
参考文献
缩略词
附录
1.硕士期间发表研究论文
2.硕士期间参加会议
3.硕士期间参加课题
致谢
本文编号：3781396
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 植物激素与衰老的研究
1.1 植物衰老概念与衰老类型
1.2 植物衰老的诱导
1.3 叶片衰老的分子基础
1.3.1 叶片衰老相关基因的分类
1.3.2 叶片衰老相关基因的表达调控
2 矮牵牛研究概况
3 油菜素内酯的研究进展
3.1 油菜素内酯合成和代谢途径
3.2 油菜素内酯合成途径
3.3 油菜素内酯代谢途径
3.4 油菜素内酯的生理功能
3.4.1 细胞伸长与分裂
3.4.2 促进光合作用
3.4.3 调节衰老
3.4.4 逆境响应
3.5 油菜素内酯与其它植物激素之间的相互作用
3.5.1 油菜素内酯与生长素之间的关系
3.5.2 油菜素内酯与赤霉素之间的关系
3.5.3 油菜素内酯与细胞分裂素之间的关系
3.5.4 油菜素内酯与脱落酸之间的关系
3.5.5 油菜素内酯与乙烯之间的关系
4 花卉分子育种研究进展及存在的问题
5 研究目的和意义
第二章 转SAG12-BAS1基因烟草植株的获得
1 材料与方法
1.1 材料供试
1.2 实验试剂及仪器
1.2.1 主要试剂
1.2.2 主要仪器
1.3 主要溶液的配制
1.3.1 主要试剂的配制
1.3.2 主要培养基的配制
2 实验方法
2.1 植物表达载体构建
2.2 大肠杆菌感受态细胞制备
2.3 大肠杆菌的DNA转化
2.4 质粒DNA提取
2.5 农杆菌感受态细胞制备
2.6 农杆菌的DNA转化
2.7 农杆菌菌液PCR鉴定
2.8 菌种保存
2.9 遗传转化
2.9.1 农杆菌活化与培养
2.9.2 农杆菌介导的烟草遗传转化
2.9.3 抗性芽筛选和生根
2.9.4 烟草的炼苗与移栽
2.10 转基因植株GUS组织化学染色
2.11 烟草植株DNA提取
2.12 烟草基因组DNA的PCR
2.13 生长观察试验
2.14 转基因烟草叶绿素含量测定和保护性酶活性的测定
2.14.1 叶绿素含量测定
2.14.2 烟草中SOD酶活和MDA含量的测定
2.15 植物激素含量测定
3 结果与分析
3.1 植物表达载体的获得
3.2 农杆菌介导的烟草遗传转化与转基因植株获得
3.3 植物表型及叶片衰老分析
3.4 转基因烟草理化指标测定和叶片衰老进程
3.5 烟草植株中细胞分裂素含量的测定
4 讨论
第三章转 基因矮牵牛的获得
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验试剂，仪器，主要溶液的配制(参考第三章：实验材料)
2 实验方法 (参考第三章：实验方法)
2.1 农杆菌介导的矮牵牛遗传转化
2.2 抗性芽筛选和生根
2.3 矮牵牛的炼苗与移栽
2.4 转基因植株GUS组织化学染色(参考第三章：烟草组织化学染色)
2.5 矮牵牛植株DNA提取
2.6 矮牵牛基因组DNA的PCR鉴定
2.7 叶片的离体培养及花朵寿命的检测
2.8 叶绿素含量测定及可溶性糖测定
2.9 SOD、POD和CAT酶活性测定及MDA含量测定：
2.10 矮牵牛衰老相关基因表达分析
2.10.1 矮牵牛叶及花中提取总RNA
2.10.2 cDNA第一链合成
2.10.3 Real time-PCR反应
3 结果分析
3.1 农杆菌介导的矮牵牛遗传转化与转基因植株获得
3.2 矮牵牛植物表型及叶片衰老分析
3.3 转基因矮牵牛理化指标测定和叶片衰老进程
3.4 转BAS1基因对植物衰老相关基因表达的影响
4 讨论
第四章 结论、创新与展望
1 研究结论
(1)转基因烟草
(2)转基因矮牵牛
2 研究创新
3 研究展望
参考文献
缩略词
附录
1.硕士期间发表研究论文
2.硕士期间参加会议
3.硕士期间参加课题
致谢
本文编号：3781396
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3781396.html
