甘蓝ARC1与Exo70A1识别模体的确定及相互作用研究
发布时间：2023-04-08 00:19
自交不亲和性(self-incompatibility,SI)是植物在长期进化过程中形成的一种特殊生殖机制,它能够促进异花授粉抑制自花授粉从而保持高度杂合性,是植物遗传变异的重要保证。芸薹属植物自交不亲和性在遗传上受单基因S位点(S-locus)上的复等位基因控制,花粉雄性决定因子SCR(S-locus cysteine-rich protein)与柱头雌性决定因子SRK(S-locus protein kinase)发生特异性识别,将胞外信号传递至SRK胞内激酶域,使得SRK激酶域解除THLI/THL2的抑制作用而发生磷酸化,进而引发ARC1(arm repeat containing 1)的磷酸化和细胞质定位,活化的ARC1与胞质内靶蛋白Exo70A1结合,在泛素激活酶E1与泛素结合酶E2的共同协助下,Exo70A1经26S“泛素化—蛋白酶体途径”发生降解,最终导致自花花粉的萌发受阻或花粉管的生长受到抑制。本研究利用酵母双杂交系统及GST pull-down技术研究甘蓝自交不亲和反应中臂重复蛋白ARC1与Exo70A1间的相互作用。对11种甘蓝材料的ARC1及Exo70A1基因进行...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 芸薹属植物自交不亲和性研究进展
1.1.1 芸薹属植物孢子体自交不亲和反应信号传导途径研究进展
1.1.2 ARC1的结构及功能研究进展
1.1.3 Exo70A1的结构及功能研究进展
1.2 基于重叠延伸PCR的定点突变技术
1.2.1 重叠延伸PCR技术原理
1.2.2 重叠延伸PCR在定点突变中的应用
1.3 酵母双杂交技术
1.3.1 酵母双杂交系统原理
1.3.2 酵母双杂交系统在蛋白质相互作用研究中的应用
1.4 GST pull-down技术
1.4.1 GST pull-down技术原理
1.4.2 GST pull-down技术在蛋白质相互作用研究中的应用
第二章 引言
2.1 研究背景及目的意义
2.2 技术路线
第三章 材料及方法
3.1 材料
3.2 ARC1及Exo70A1编码基因的克隆及序列分析
3.2.1 ARC1及Exo70A1编码基因的PCR扩增
3.2.2 ARC1及Exo70A1编码基因的TA克隆
3.3 ARC1及Exo70A1序列的短截及突变
3.3.1 ARC1序列的短截及突变
3.3.2 Exo70A1序列的短截
3.4 ARC1和Exo70A1相互作用的酵母双杂交技术检测
3.4.1 酵母重组载体的构建
3.4.2 重组质粒的毒性及自激活检测
3.4.3 酵母双杂交检测ARC1和Exo70A1的相互作用
3.5 ARC1和Exo70A1相互作用的GST pull-down技术体外检测
3.5.1 原核表达载体的构建
3.5.2 融合蛋白的体外表达及纯化
3.5.3 GST pull-down鉴定ARC1与Exo70A1的相互作用
3.6 ARC1-Exo70A1互作模体编码序列的聚类分析
第四章 结果与分析
4.1 基因的克隆及序列分析
4.1.1 11种甘蓝材料ARC1及Exo70A1基因的扩增
4.1.2 ARC1及Exo70A1基因的序列分析
4.2 特异性引物PCR所产生的缩短和突变的变异体群
4.2.1 ARC1序列的短截及突变
4.2.2 Exo70A1序列的短截
4.3 ARC1-Exo70A1相互作用的酵母双杂交检测分析
4.3.1 酵母载体的构建与分析
4.3.2 重组质粒转化酵母的毒性及其自激活鉴定
4.3.3 ARC1-Exo70A1的酵母双杂交相互作用检测
4.4 ARC1-Exo70A1相互作用的GST pull-down体外验证
4.4.1 原核表达载体的构建与分析
4.4.2 融合蛋白的诱导表达
4.4.3 GST pull-down验证ARC1-Exo70A1相互作用
4.5 ARC1-Exo70A1互作模体的确定及分析
4.5.1 ARC1-Exo70A1相互作用模体的确定
4.5.2 ARC1-Exo70A1互作区段编码序列的聚类分析
第五章 讨论与结论
5.1 讨论
5.2 结论
参考文献
附录
致谢
在读期间发表的学术论文
在读期间参与的科研项目及获奖
本文编号：3785621
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 芸薹属植物自交不亲和性研究进展
1.1.1 芸薹属植物孢子体自交不亲和反应信号传导途径研究进展
1.1.2 ARC1的结构及功能研究进展
1.1.3 Exo70A1的结构及功能研究进展
1.2 基于重叠延伸PCR的定点突变技术
1.2.1 重叠延伸PCR技术原理
1.2.2 重叠延伸PCR在定点突变中的应用
1.3 酵母双杂交技术
1.3.1 酵母双杂交系统原理
1.3.2 酵母双杂交系统在蛋白质相互作用研究中的应用
1.4 GST pull-down技术
1.4.1 GST pull-down技术原理
1.4.2 GST pull-down技术在蛋白质相互作用研究中的应用
第二章 引言
2.1 研究背景及目的意义
2.2 技术路线
第三章 材料及方法
3.1 材料
3.2 ARC1及Exo70A1编码基因的克隆及序列分析
3.2.1 ARC1及Exo70A1编码基因的PCR扩增
3.2.2 ARC1及Exo70A1编码基因的TA克隆
3.3 ARC1及Exo70A1序列的短截及突变
3.3.1 ARC1序列的短截及突变
3.3.2 Exo70A1序列的短截
3.4 ARC1和Exo70A1相互作用的酵母双杂交技术检测
3.4.1 酵母重组载体的构建
3.4.2 重组质粒的毒性及自激活检测
3.4.3 酵母双杂交检测ARC1和Exo70A1的相互作用
3.5 ARC1和Exo70A1相互作用的GST pull-down技术体外检测
3.5.1 原核表达载体的构建
3.5.2 融合蛋白的体外表达及纯化
3.5.3 GST pull-down鉴定ARC1与Exo70A1的相互作用
3.6 ARC1-Exo70A1互作模体编码序列的聚类分析
第四章 结果与分析
4.1 基因的克隆及序列分析
4.1.1 11种甘蓝材料ARC1及Exo70A1基因的扩增
4.1.2 ARC1及Exo70A1基因的序列分析
4.2 特异性引物PCR所产生的缩短和突变的变异体群
4.2.1 ARC1序列的短截及突变
4.2.2 Exo70A1序列的短截
4.3 ARC1-Exo70A1相互作用的酵母双杂交检测分析
4.3.1 酵母载体的构建与分析
4.3.2 重组质粒转化酵母的毒性及其自激活鉴定
4.3.3 ARC1-Exo70A1的酵母双杂交相互作用检测
4.4 ARC1-Exo70A1相互作用的GST pull-down体外验证
4.4.1 原核表达载体的构建与分析
4.4.2 融合蛋白的诱导表达
4.4.3 GST pull-down验证ARC1-Exo70A1相互作用
4.5 ARC1-Exo70A1互作模体的确定及分析
4.5.1 ARC1-Exo70A1相互作用模体的确定
4.5.2 ARC1-Exo70A1互作区段编码序列的聚类分析
第五章 讨论与结论
5.1 讨论
5.2 结论
参考文献
附录
致谢
在读期间发表的学术论文
在读期间参与的科研项目及获奖
本文编号：3785621
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