西瓜低温响应MYB（Cla007586）转录因子的功能鉴定及互作蛋白分析
发布时间：2023-04-16 14:09
西瓜(Citrullus lanatus)是世界范围内广泛栽培和食用的园艺作物,具有很高的经济价值。低温是常见的环境胁迫因子,严重制约农业生产。西瓜属于喜温性作物,在早春和反季节设施栽培过程中,常常受到低温胁迫,影响产量和经济效益。研究西瓜低温响应基因的功能及调控网络,不仅可以解析西瓜的低温耐受性机制,也能为西瓜耐低温品种的遗传改良提供理论依据,具有重要的理论意义和现实意义。模式植物上的研究表明,MYB转录因子在植物响应低温及抵御低温过程中发挥着重要的调控作用。本课题在前期研究中,从低温胁迫下西瓜转录组数据中发现了一个显著上调表达的基因Cla007586,经鉴定为一个典型的R2R3型MYB转录因子。该MYB转录因子是否具有调控西瓜低温耐受性的功能及其是如何调控的,目前尚不清楚。为回答以上问题,本研究克隆了该基因,构建了过表达载体对烟草进行了遗传转化,分析了过表达烟草植株在低温胁迫下的表型和生理生化指标的变化,同时,通过酵母双杂交系统筛选出了其在西瓜中的潜在互作蛋白。主要研究结果如下:1.序列分析表明,Cla007586基因是一个典型的R2R3型MYB转录因子,开放阅读框长861 bp,...
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 MYB转录因子的研究进展
1.2.1 MYB转录因子的发现
1.2.2 MYB转录因子的结构特点与分类
1.2.3 MYB转录因子的生物学功能
1.2.4 MYB蛋白调控网络的研究
1.3 低温胁迫对植物的影响
1.3.1 低温胁迫对植物生理水平的影响
1.3.2 低温胁迫对植物分子水平的影响
1.4 研究目的和意义
2 材料与方法
2.1 低温胁迫下Cla007586的表达分析
2.1.1 植物材料培养及低温处理
2.1.2 CTAB法提取基因组DNA
2.1.3 Trans Zol法提取基因组RNA
2.1.4 反转录合成cDNA
2.1.5 内参基因的选择和引物设计
2.1.6 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析
2.2 农杆菌介导Cla007586基因的烟草遗传转化
2.2.1 构建pHellsgate8-Cla007586植物过表达载体
2.2.2 制备农杆菌LBA4404感受态
2.2.3 转化农杆菌LBA4404感受态
2.2.4 农杆菌叶盘法介导转化栽培烟草
2.2.5 转基因烟草植株的鉴定
2.3 Cla007586过表达烟草植株的低温抗性鉴定
2.3.1 植物材料培养及低温处理
2.3.2 电导率的测定
2.3.3 丙二醛含量的测定
2.4 Cla007586的亚细胞定位
2.4.1 构建pK7FWG2-Cla007586表达载体
2.4.2 制备并转化农杆菌GV3101感受态
2.4.3 农杆菌介导转化本氏烟草及定位观察
2.5 Cla007586的互作蛋白筛选
2.5.0 构建西瓜叶片低温胁迫均一化cDNA文库
2.5.1 构建酵母诱饵载体
2.5.2 制备酵母感受态
2.5.3 转化酵母感受态
2.5.4 检测诱饵载体的自激活性
2.5.5 检测诱饵载体的毒性
2.5.6 Mating法酵母双杂交筛库
2.5.7 阳性菌斑测序结果分析
2.5.8 互作蛋白的点对点验证
3 结果与分析
3.1 Cla007586基因的序列分析
3.2 Cla007586基因的表达分析
3.3 Cla007586的亚细胞定位
3.4 Cla007586过表达烟草植株的获得
3.5 Cla007586过表达烟草植株的低温抗性分析
3.5.1 转基因与野生型烟草低温处理下的表型差异
3.5.2 转基因与野生型烟草低温处理下细胞膜透性的变化
3.5.3 转基因与野生型烟草低温处理下丙二醛含量的变化
3.6 Cla007586互作蛋白的筛选及分析
3.6.1 诱饵载体pGBKT7-Cla007586的毒性效应
3.6.2 诱饵载体pGBKT7-Cla007586的自激活效应及AbA浓度筛选
3.6.3 诱饵载体与酵母文库双杂交筛选
3.6.4 杂交阳性菌斑的PCR鉴定及测序
3.6.5 阳性菌斑测序序列分析及功能预测
3.7 Cla007586候选互作蛋白的点对点验证
4 讨论
4.1 Cla007586转录因子的表达及亚细胞定位
4.2 Cla007586转录因子的功能分析
4.3 Cla007586互作蛋白分析
参考文献
附录Ⅰ：Mating阳性克隆测序序列
附录Ⅱ：常用培养基的配置
附录Ⅲ：硕士期间发表论文和申请专利
致谢
本文编号：3791415
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 MYB转录因子的研究进展
1.2.1 MYB转录因子的发现
1.2.2 MYB转录因子的结构特点与分类
1.2.3 MYB转录因子的生物学功能
1.2.4 MYB蛋白调控网络的研究
1.3 低温胁迫对植物的影响
1.3.1 低温胁迫对植物生理水平的影响
1.3.2 低温胁迫对植物分子水平的影响
1.4 研究目的和意义
2 材料与方法
2.1 低温胁迫下Cla007586的表达分析
2.1.1 植物材料培养及低温处理
2.1.2 CTAB法提取基因组DNA
2.1.3 Trans Zol法提取基因组RNA
2.1.4 反转录合成cDNA
2.1.5 内参基因的选择和引物设计
2.1.6 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析
2.2 农杆菌介导Cla007586基因的烟草遗传转化
2.2.1 构建pHellsgate8-Cla007586植物过表达载体
2.2.2 制备农杆菌LBA4404感受态
2.2.3 转化农杆菌LBA4404感受态
2.2.4 农杆菌叶盘法介导转化栽培烟草
2.2.5 转基因烟草植株的鉴定
2.3 Cla007586过表达烟草植株的低温抗性鉴定
2.3.1 植物材料培养及低温处理
2.3.2 电导率的测定
2.3.3 丙二醛含量的测定
2.4 Cla007586的亚细胞定位
2.4.1 构建pK7FWG2-Cla007586表达载体
2.4.2 制备并转化农杆菌GV3101感受态
2.4.3 农杆菌介导转化本氏烟草及定位观察
2.5 Cla007586的互作蛋白筛选
2.5.0 构建西瓜叶片低温胁迫均一化cDNA文库
2.5.1 构建酵母诱饵载体
2.5.2 制备酵母感受态
2.5.3 转化酵母感受态
2.5.4 检测诱饵载体的自激活性
2.5.5 检测诱饵载体的毒性
2.5.6 Mating法酵母双杂交筛库
2.5.7 阳性菌斑测序结果分析
2.5.8 互作蛋白的点对点验证
3 结果与分析
3.1 Cla007586基因的序列分析
3.2 Cla007586基因的表达分析
3.3 Cla007586的亚细胞定位
3.4 Cla007586过表达烟草植株的获得
3.5 Cla007586过表达烟草植株的低温抗性分析
3.5.1 转基因与野生型烟草低温处理下的表型差异
3.5.2 转基因与野生型烟草低温处理下细胞膜透性的变化
3.5.3 转基因与野生型烟草低温处理下丙二醛含量的变化
3.6 Cla007586互作蛋白的筛选及分析
3.6.1 诱饵载体pGBKT7-Cla007586的毒性效应
3.6.2 诱饵载体pGBKT7-Cla007586的自激活效应及AbA浓度筛选
3.6.3 诱饵载体与酵母文库双杂交筛选
3.6.4 杂交阳性菌斑的PCR鉴定及测序
3.6.5 阳性菌斑测序序列分析及功能预测
3.7 Cla007586候选互作蛋白的点对点验证
4 讨论
4.1 Cla007586转录因子的表达及亚细胞定位
4.2 Cla007586转录因子的功能分析
4.3 Cla007586互作蛋白分析
参考文献
附录Ⅰ：Mating阳性克隆测序序列
附录Ⅱ：常用培养基的配置
附录Ⅲ：硕士期间发表论文和申请专利
致谢
本文编号：3791415
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3791415.html
