蓝莓VcMYB、VcHSP17.7基因功能研究和叶片再生体系的建立
发布时间：2023-06-05 04:51
蓝莓是重要的小浆果作物,其果实营养价值高,有益于人体健康,因此近年来消费需求量稳定地增加。而蓝莓植株在生产中容易受到干旱、低温和盐等逆境胁迫的危害,限制了蓝莓的生产和栽培面积的扩大等。因此,阐明蓝莓的耐逆性机制和提高蓝莓的抗逆性对蓝莓生产具有重要的指导意义。MYB转录因子和小热激蛋白(Small heat shock protein,sHSP)在响应逆境胁迫中发挥着多方面的作用。本研究旨在获得蓝莓(Vaccinium corymbosum L.)sHSP基因及调控原花青素(Proanthocyanidins,PAs)合成相关的MYB转录因子及其启动子,并对其特性和功能进行初步分析,建立了‘杰兔’蓝莓品种的叶片再生体系,以期为提高蓝莓抗逆性和蓝莓抗逆育种研究提供理论依据和奠定基础。主要研究结果如下:1.通过RT-PCR法和RACE技术克隆得到了蓝莓的转录因子VcMYB,其三级结构含有Myb-DNA-binding结构域,预测VcMYB蛋白定位于细胞核,与Vaccinium uliginosum的VuMYB的同源性高,亲缘关系近。2.烟草瞬时表达结果显示,VcMYB定位于细胞核。3.用qR...
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
1. 引言
1.1. 研究背景
1.2. MYB转录因子与原花青素合成与调控研究进展
1.2.1. 原花青素及其代谢
1.2.2. MYB转录因子与原花青素代谢调控
1.3. 植物热激蛋白研究进展
1.3.1. 植物热激蛋白(HSP)
1.3.2. 植物小热激蛋白(sHSP)
1.4. 蓝莓叶片再生研究进展
1.4.1. 蓝莓叶片再生的影响因素
1.4.2. 蓝萄叶片再生与遗传转化
1.5. 研究目的和意义
1.6. 主要研究内容
1.7. 技术路线
2. 蓝莓VcMYB转录因子的功能研究
2.1. 试验材料
2.1.1. 植物材料
2.1.2. 载体和菌株
2.1.3. 化学试剂
2.1.4. 试验仪器设备
2.1.5. 培养基和溶液配制
2.2. 试验方法
2.2.1. RNA的提取
2.2.2. cDNA的合成
2.2.3. DNA的提取
2.2.4. 拟南芥的培养
2.2.5. VcMYB转录因子的克隆
2.2.6. 生物信息学分析
2.2.7. 表达载体构建
2.2.8. 拟南芥转化
2.2.9. 瞬时转化法转化本生烟
2.2.10. 荧光定量PCR
2.2.11. VcMYB启动子的克隆与拟南芥转化
2.2.12. 引物
2.3. 结果与分析
2.3.1. 提取蓝莓总RNA
2.3.2. 获得VcMYB全长
2.3.3. VcMYB生物信息学分析
2.3.4. VcMYB亚细胞定位分析
2.3.5. VcMYB表达模式分析
2.3.6. VcMYB转基因拟南芥的获得与鉴定
2.3.7. VcMYB启动子的获得与功能分析
2.4. 讨论
2.5. 小结
3. 蓝莓VcHSP17.7基因的功能研究
3.1. 试验材料
3.1.1. 植物材料
3.1.2. 菌株和载体
3.1.3. 试验仪器设备
3.1.4. 试验试剂和培养基
3.2. 试验方法
3.2.1. VcHSP17. 7基因全长扩增
3.2.2. VcHSP17.7生物信息学分析
3.2.3. 表达载体构建
3.2.4. 拟南芥转化
3.2.5. 转化本生烟草
3.2.6. 拟南芥和蓝莓的胁迫处理
3.2.7. 生理指标的测定
3.2.8. 荧光定量PCR
3.2.9. VcHSP17.7基因启动子的克隆
3.2.10. VcHSP17.7的原核表达
3.2.11. 引物
3.3. 结果与分析
3.3.1. 获得VcHSP17.7基因全长
3.3.2. VcHSP17.7生物信息学分析
3.3.3. VcHSP17.7基因表达特性
3.3.4. VcHSP17.7基因亚细胞定位分析
3.3.5. VcHSP17.7转基因拟南芥的获得与鉴定
3.3.6. VcHSP17.7基因启动子的获得与分析
3.3.7. VcHSP17.7基因原核表达
3.4. 讨论
3.5. 小结
4. 蓝莓叶片再生体系的建立
4.1. 材料与方法
4.1.1. 试验材料与培养条件
4.1.2. 试验方法
4.2. 结果与分析
4.2.1. 蓝莓试管苗的获得及增殖
4.2.2. 蓝莓叶片再生体系的建立
4.3. 讨论
4.4. 小结
5. 总结与展望
5.1. 全文总结
5.2. 主要创新点
5.3. 展望
参考文献
附录
个人简介
导师简介
获得成果目录清单
致谢
本文编号：3831721
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
1. 引言
1.1. 研究背景
1.2. MYB转录因子与原花青素合成与调控研究进展
1.2.1. 原花青素及其代谢
1.2.2. MYB转录因子与原花青素代谢调控
1.3. 植物热激蛋白研究进展
1.3.1. 植物热激蛋白(HSP)
1.3.2. 植物小热激蛋白(sHSP)
1.4. 蓝莓叶片再生研究进展
1.4.1. 蓝莓叶片再生的影响因素
1.4.2. 蓝萄叶片再生与遗传转化
1.5. 研究目的和意义
1.6. 主要研究内容
1.7. 技术路线
2. 蓝莓VcMYB转录因子的功能研究
2.1. 试验材料
2.1.1. 植物材料
2.1.2. 载体和菌株
2.1.3. 化学试剂
2.1.4. 试验仪器设备
2.1.5. 培养基和溶液配制
2.2. 试验方法
2.2.1. RNA的提取
2.2.2. cDNA的合成
2.2.3. DNA的提取
2.2.4. 拟南芥的培养
2.2.5. VcMYB转录因子的克隆
2.2.6. 生物信息学分析
2.2.7. 表达载体构建
2.2.8. 拟南芥转化
2.2.9. 瞬时转化法转化本生烟
2.2.10. 荧光定量PCR
2.2.11. VcMYB启动子的克隆与拟南芥转化
2.2.12. 引物
2.3. 结果与分析
2.3.1. 提取蓝莓总RNA
2.3.2. 获得VcMYB全长
2.3.3. VcMYB生物信息学分析
2.3.4. VcMYB亚细胞定位分析
2.3.5. VcMYB表达模式分析
2.3.6. VcMYB转基因拟南芥的获得与鉴定
2.3.7. VcMYB启动子的获得与功能分析
2.4. 讨论
2.5. 小结
3. 蓝莓VcHSP17.7基因的功能研究
3.1. 试验材料
3.1.1. 植物材料
3.1.2. 菌株和载体
3.1.3. 试验仪器设备
3.1.4. 试验试剂和培养基
3.2. 试验方法
3.2.1. VcHSP17. 7基因全长扩增
3.2.2. VcHSP17.7生物信息学分析
3.2.3. 表达载体构建
3.2.4. 拟南芥转化
3.2.5. 转化本生烟草
3.2.6. 拟南芥和蓝莓的胁迫处理
3.2.7. 生理指标的测定
3.2.8. 荧光定量PCR
3.2.9. VcHSP17.7基因启动子的克隆
3.2.10. VcHSP17.7的原核表达
3.2.11. 引物
3.3. 结果与分析
3.3.1. 获得VcHSP17.7基因全长
3.3.2. VcHSP17.7生物信息学分析
3.3.3. VcHSP17.7基因表达特性
3.3.4. VcHSP17.7基因亚细胞定位分析
3.3.5. VcHSP17.7转基因拟南芥的获得与鉴定
3.3.6. VcHSP17.7基因启动子的获得与分析
3.3.7. VcHSP17.7基因原核表达
3.4. 讨论
3.5. 小结
4. 蓝莓叶片再生体系的建立
4.1. 材料与方法
4.1.1. 试验材料与培养条件
4.1.2. 试验方法
4.2. 结果与分析
4.2.1. 蓝莓试管苗的获得及增殖
4.2.2. 蓝莓叶片再生体系的建立
4.3. 讨论
4.4. 小结
5. 总结与展望
5.1. 全文总结
5.2. 主要创新点
5.3. 展望
参考文献
附录
个人简介
导师简介
获得成果目录清单
致谢
本文编号：3831721
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