CsHIR1对黄瓜遗传转化的初步研究
发布时间：2023-08-03 19:14
霜霉病是黄瓜(CucumissativusL.)栽培上最主要的卵菌病害之一,严重影响黄瓜的产量和品质。为了初步探讨黄瓜蛋白酶抑制剂基因(CsPI)和过敏性诱导反应蛋白基因(CsHIR1)在黄瓜霜霉病抗性中的作用,本试验以抗病种质“PI088”和感病种质“CCMC”为材料,在转录水平上对CsPI和CsHIR1在黄瓜霜霉病抗性中的表达特性进行分析;构建植物表达载体pCAMBIA35S-CsHIR1,在优化黄瓜再生体系的基础上,通过农杆菌介导法将CsHIR1初步转入黄瓜,取得以下主要结果:1.接种霜霉菌后CsPI和CsHIR1在转录水平上的表达特性分析本试验对接种霜霉菌后0h、3h、6h、12h、1d、2d、4d、7d的CCMC和PI088的叶片进行半定量分析,结果表明在接种霜霉菌4d后感病种质CCMC的CsPI和CsHIR1的表达量显著提高,而PI088在接种初期CsPI和CsHIR1就有较高的表达水平,12h后表达量逐渐降低,说明CsPI和CsHIR1都参与了黄瓜对霜霉菌的抗性反应。2.再生体系的优化本研究以CCMC的子叶节为外植体,通过比较分析发现苗龄为3-5d的外植体的再生率显著高于...
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 霜霉病
1.1.1 霜霉病抗性基因定位研究进展
1.1.2 霜霉病的抗性机制研究进展
1.2 过敏性诱导反应蛋白HIR
1.3 蛋白酶因制剂PI
1.4 黄瓜再生的影响因素
1.4.1 基因型
1.4.2 外植体类型
1.4.3 植物生长调节剂
1.4.4 其它因素
1.5 黄瓜的遗传转化
1.5.1 农杆菌介导法
1.5.2 基因枪法
1.5.3 原生质体法
1.5.4 花粉管通道法
1.6 标记基因
1.7 选题的目的与意义
第二章 试验材料和方法
2.1 植物材料、菌种和质粒
2.2 主要试剂和仪器设备
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要仪器
2.3 抗/感种质霜霉菌接种
2.3.1 幼苗培养
2.3.2 霜霉菌接种
2.3.3 病情指数统计
2.4 抗/感种质接种霜霉菌后CSPI和CSHIR1的半定量分析
2.4.1 黄瓜叶片总RNA的提取
2.4.2 RNA反转录
2.4.3 基因CsPI和CsHIR1的半定量
2.5 载体构建
2.5.1 黄瓜叶片总RNA的提取及反转录
2.5.2 CsHIR1克隆
2.5.3 植物表达载体的构建
2.5.4 农杆菌感受态的制备
2.5.5 转化大肠杆菌
2.5.6 农杆菌转化
2.6 黄瓜再生体系的优化
2.6.1 准备工作
2.6.2 种子生根培养
2.6.3 外植体的筛选
2.6.4 外植体的再生培养
2.6.5 再生芽的生根培养
2.6.6 再生植株的驯化移栽
2.6.7 再生率统计
2.7 黄瓜的遗传转化
2.7.1 农杆菌的活化培养
2.7.2 农杆菌侵染和共培养
2.7.3 转化植株的移栽和授粉
2.7.4 数据统计与分析
2.8 转化植株的鉴定
2.8.1 植物总DNA的CTAB提取方法
2.8.2 T0代转化植株PCR检测
2.8.3 T1代转化植株检测和实时荧光定量分析
第三章 结果与分析
3.1 霜霉菌接种后抗/感种质CSHIR1和CSPI在转录水平上的表达分析
3.1.1 霜霉菌接种后抗/感种质的病情指数统计
3.1.2 黄瓜总RNA的检测
3.1.3 CsHIR1和CsPI半定量分析
3.2 黄瓜再生培养体系的优化
3.2.1 不同的子叶节对再生频率的影响
3.2.2 黄瓜再生过程
3.3 CSHIR1对黄瓜的遗传转化初步分析
3.3.1 CsHIR1克隆
3.3.2 黄瓜CsHIR1表达载体的构建
3.3.3 CsHIR1对黄瓜的遗传转化
3.4 黄瓜CSHIR1转基因植株的检测
3.4.1 T0代转基因植株的PCR检测和数据分析
3.4.2 T1代转基因植株的检测和数据分析
第四章 讨论和结论
4.1 讨论
4.2 结论
4.2.1 接种霜霉菌后CsPI和CsHIR1在转录水平上的特性分析
4.2.2 构建表达载体pCAMBIA35S-CsHIR1
4.2.3 黄瓜再生体系的优化
4.2.4 黄瓜的遗传转化
参考文献
缩略词
附录
致谢
作者简介
本文编号：3838653
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 霜霉病
1.1.1 霜霉病抗性基因定位研究进展
1.1.2 霜霉病的抗性机制研究进展
1.2 过敏性诱导反应蛋白HIR
1.3 蛋白酶因制剂PI
1.4 黄瓜再生的影响因素
1.4.1 基因型
1.4.2 外植体类型
1.4.3 植物生长调节剂
1.4.4 其它因素
1.5 黄瓜的遗传转化
1.5.1 农杆菌介导法
1.5.2 基因枪法
1.5.3 原生质体法
1.5.4 花粉管通道法
1.6 标记基因
1.7 选题的目的与意义
第二章 试验材料和方法
2.1 植物材料、菌种和质粒
2.2 主要试剂和仪器设备
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要仪器
2.3 抗/感种质霜霉菌接种
2.3.1 幼苗培养
2.3.2 霜霉菌接种
2.3.3 病情指数统计
2.4 抗/感种质接种霜霉菌后CSPI和CSHIR1的半定量分析
2.4.1 黄瓜叶片总RNA的提取
2.4.2 RNA反转录
2.4.3 基因CsPI和CsHIR1的半定量
2.5 载体构建
2.5.1 黄瓜叶片总RNA的提取及反转录
2.5.2 CsHIR1克隆
2.5.3 植物表达载体的构建
2.5.4 农杆菌感受态的制备
2.5.5 转化大肠杆菌
2.5.6 农杆菌转化
2.6 黄瓜再生体系的优化
2.6.1 准备工作
2.6.2 种子生根培养
2.6.3 外植体的筛选
2.6.4 外植体的再生培养
2.6.5 再生芽的生根培养
2.6.6 再生植株的驯化移栽
2.6.7 再生率统计
2.7 黄瓜的遗传转化
2.7.1 农杆菌的活化培养
2.7.2 农杆菌侵染和共培养
2.7.3 转化植株的移栽和授粉
2.7.4 数据统计与分析
2.8 转化植株的鉴定
2.8.1 植物总DNA的CTAB提取方法
2.8.2 T0代转化植株PCR检测
2.8.3 T1代转化植株检测和实时荧光定量分析
第三章 结果与分析
3.1 霜霉菌接种后抗/感种质CSHIR1和CSPI在转录水平上的表达分析
3.1.1 霜霉菌接种后抗/感种质的病情指数统计
3.1.2 黄瓜总RNA的检测
3.1.3 CsHIR1和CsPI半定量分析
3.2 黄瓜再生培养体系的优化
3.2.1 不同的子叶节对再生频率的影响
3.2.2 黄瓜再生过程
3.3 CSHIR1对黄瓜的遗传转化初步分析
3.3.1 CsHIR1克隆
3.3.2 黄瓜CsHIR1表达载体的构建
3.3.3 CsHIR1对黄瓜的遗传转化
3.4 黄瓜CSHIR1转基因植株的检测
3.4.1 T0代转基因植株的PCR检测和数据分析
3.4.2 T1代转基因植株的检测和数据分析
第四章 讨论和结论
4.1 讨论
4.2 结论
4.2.1 接种霜霉菌后CsPI和CsHIR1在转录水平上的特性分析
4.2.2 构建表达载体pCAMBIA35S-CsHIR1
4.2.3 黄瓜再生体系的优化
4.2.4 黄瓜的遗传转化
参考文献
缩略词
附录
致谢
作者简介
本文编号：3838653
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