乌菜花青素合成酶基因克隆及序列分析

发布时间：2023-08-04 19:36

　　本课题的研究对象——乌菜产于我国长江流域一带,其主要是通过原十字花科芸薹在长期的自然选择中变异而来,同大多数植物一样,乌菜叶片也主要为绿色以及黄绿色,并结合不同的地理位置和气候条件呈现出不同的叶色。该植物为二年生草本植物【1】。因为乌菜营养丰富,味道鲜美,在全国各地均有引种栽培,并形成了许多地方品种。对植物所含营养指标进行评定时,花青素含量也是一个重要指标。花青素(Anthocyanidin)就是在各类植物中都广泛具有的一种类黄酮化合物有机物,具有较好的溶水性。其决定植物果实和花瓣颜色。花青素对于人体的健康会产生影响作用,在发挥作用时,主要是以一种抗氧化剂的形式参与到人体的新陈代谢中,从而提高肌肤活力,促进血液循环,从而来预防氧化和动脉硬化,另外该物质还能有效为人体提供低糖量的糖类物质,对于糖尿病患者而言,是能够帮助自身进行病情治疗的物质[6,7]。目前不管是医学方面还是生物方面,对于花青素的使用与研究处于比较深入的状态,很多专家学者从医学需要等方面出发,致力于通过生物技术进行人工花青素的合成。在合成的原料中,最为必要的是ANS反应酶,该酶可以促进花青素的有效合成,实现花色素有无颜色的...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略符
1 文献综述
    1.1 花青素简介
    1.2 花青素种类
    1.3 花青素应用及生理功能研究
        1.3.1 花青素应用
        1.3.2 花青素生理功能研究
        1.3.3 花青素的生物合成
    1.4 花青素合成酶
        1.4.1 花青素合成酶简介
        1.4.2 相关植物ANS研究
    1.5 乌菜研究
        1.5.1 植物学特征
        1.5.2 生物学特性
        1.5.3 类型
        1.5.4 营养价值
2 引言
3 RNA提取、cDNA的合成及品种筛选
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试剂与仪器
        3.1.3 试验方法
    3.2 结果分析
        3.2.1 RNA电泳鉴定
        3.2.2 溶解曲线分析
        3.2.3 花青素合成酶基因相对表达量分析
4 ANS基因克隆及序列分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验材料与试剂
        4.1.2 试验仪器
        4.1.3 试验方法
    4.2 结果分析
5 正义表达载体构建
    5.1 试验方法
        5.1.1 目的基因片段的获得
        5.1.2 表达载体PBI121的酶切反应及所得片段的回收
        5.1.3 连接反应
        5.1.4 热激法转化E．coli DH5a
        5.1.5 重组质粒的筛选及菌液的保存
        5.1.6 重组质粒的鉴定方法
    5.2 结果分析
        5.2.1 利用PCR验证重组质粒
        5.2.2 利用酶切进行鉴定
6 讨论
    6.1 RNA提取过程中的问题及对策
    6.2 实时荧光定量PCR实验中的问题及对策
    6.3 PCR扩增和连接转化过程中的问题及对策
7 结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3838876