青杄转录因子NF-YB8/13表达特性分析及在花粉萌发中功能探究

发布时间：2023-10-06 08:13

　　NF-Y是一类转录因子,普遍存在于植物、动物以及微生物中,是一个包含三个亚基NF-YA,NF-YB,NF-YC的三聚体蛋白。近年来,许多研究结果表明NF-Y家族成员参与植物生长发育和逆境响应等多种生理过程。基于前期从青杆中分离克隆得到PwNF-YB8和PwNF-YB13基因,本研究对其转录活性、表达模式及其在花粉萌发中的功能进行了相关实验分析。主要研究结果如下:1、本研究通过保守结构域、发育树分析表明,PwNF-YB8和PwNF-YB13包含CBFD结构域,属于NF-Y家族成员。在进化上PwNF-YB8和PwNF-YB13分别与拟南芥中的AtNF-YB8和AtNF-YB13亲缘关系较近。2、组织特异性实验结果表明PwNF-YB8和PwNF-YB13在花粉中表达量相对于根、茎、针叶表达量最高,且对多种非生物胁迫、激素具有响应,但在有些胁迫下响应模式上存在明显差异。在ABA激素作用下,PwNF-YB8的表达量先下降后上升,而PwNF-YB13表达量则表现为先上升后下降的趋势,整体表达量变化较小。盐胁迫下,PwNF-YB8的响应较明显,在6h上升至对照的8倍,而PwNF-YB13的响应则相对...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 转录因子的概念及其结构特征
    1.2 植物中的特异性转录因子的主要类型及功能
    1.3 植物中NF-Y转录因子
    1.4 目的意义及内容
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 所用菌种及质粒类型
        2.1.3 实验主要用的化学试剂
        2.1.4 实验仪器种类
        2.1.5 实验培养基及缓冲液配方
    2.2 实验方法
        2.2.1 载体构建
        2.2.2 拟南芥突变体鉴定
        2.2.3 拟南芥过表达植株的获得
        2.2.4 蛋白互作验证试验
        2.2.5 洋葱表皮亚细胞定位实验
        2.2.6 拟南芥的栽培方法
        2.2.7 青杆的栽培方法
        2.2.8 青杆花粉体外萌发实验
        2.2.9 PwNF-YB8和PwNF-YB13生物信息学分析
        2.2.10 PwNF-YB8和PwNF-YB13表达模式分析
    2.3 实验中所用的引物
        2.3.1 PwNF- YB8、PwNF-YB13及拟南芥中同源基因AtNF-YB8、AtNF-YB13 CDS区克隆引物
        2.3.2 PwNF- YB8、PwNF-YB13及拟南芥中同源基因爿AtNF-YB8、AtNF-YB13过表达载体引物
        2.3.3 PwNF-YB8、PwNF-YB13转录活性分析及双杂引物
        2.3.4 PwNF-YB8、PwNF-YB13及PwHAP5表达量分析引物
        2.3.5 nf-yb8和nf-yb13突变体鉴定引物
        2.3.6 拟南芥纯合突变体表达量检测引物:
        2.3.7 拟南芥过表达植株鉴定引物
        2.3.8 花粉过表达载体引物
        2.3.9 荧光素酶互补实验(LCI)引物
3 实验结果
    3.1 PwNF-YB转录因子蛋白保守结构域及进化树分析
    3.2 PwNF-YB8和PwNF-YB13表达分析
    3.3 PwNF-YB8和PwNF-YB13亚细胞定位
    3.4 花粉萌发实验
    3.5 PwNF-YB8与PwHAP5互作
        3.5.1 PwNF-YB8和PwNF-YB13转录活性分析
        3.5.2 PwNF-YB8与PwHAP5互作实验
    3.6 拟南芥突变体鉴定
    3.7 过表达植株获得与DNA水平鉴定
        3.7.1 阳性农杆菌PCR鉴定
        3.7.2 过表达植株筛选与获得
        3.7.3 过表达植株DNA水平鉴定
    3.8 花粉瞬时过表达功能研究
        3.8.1 花粉准备
        3.8.2 基因枪轰击
        3.8.3 花粉观察与记录
4 讨论
5 结论与展望
参考文献
个人简介
导师简介
获奖成果目录
致谢



本文编号：3851471