双瓣茉莉离体培养和遗传转化的初步研究
发布时间：2023-11-12 16:37
双瓣茉莉常指的是亚热带植物木犀科素馨属的双瓣茉莉[Jasminum sambac(L.)Ait],它也是福州市的市花。双瓣茉莉是一种天然的香料植物,其根、茎、叶均具有较高的药用价值,能清热解毒、活血化瘀、调经利尿等功效;茉莉因其浓郁的清香,有窖制花茶、提炼精油、制作成鲜花饼、化妆品等的商业价值,所以在我国茶叶产区双瓣茉莉的栽培面积日益扩大。由于双瓣茉莉只开花,罕见结实,所以不能进行有性繁殖,生产上常用的繁殖方式有扦插繁殖和压条繁殖,具有成苗率高、发根快、操作简便等优点。但是这种传统的繁殖方式容易使得双瓣茉莉出现品种退化、不能保持母本的优良性状等现象而且不利于培育新品种。另外,花色单一的双瓣茉莉资源也制约了观赏性状的创新。现代生物技术为园林观赏植物的创新育种提供了高效而实用的新途径,然而在双瓣茉莉中的应用研究几乎是空白。有鉴于此,本研究针对双瓣茉莉生物技术应用中最基本的瓶颈,即离体再生体系和遗传转化体系的建立进行了实验研究,为进一步开展双瓣茉莉优异基因资源开发以及新品种培育等奠定基础。本论文以双瓣茉莉为材料,主要研究实验内容及研究结果如下:(1)筛选出以茉莉茎段和叶片作为外植体诱导愈伤组...
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 双瓣双瓣茉莉概述
1.1.1 双瓣茉莉的生物学特征
1.1.2 双瓣茉莉的应用价值
1.1.3 双瓣茉莉的繁殖
1.2 木本植物组织培养再生途径
1.2.1 器官发生途径的植株再生
1.2.2 体细胞胚胎发生途径
1.3 WOX转录因子的研究
1.4 植物遗传转化的研究
1.4.1 遗传转化方法
1.4.2 转化受体材料的选择
1.4.3 农杆菌菌株的选择
1.4.4 遗传转化条件的优化
1.5 本研究的目的意义和内容
第二章 茉莉愈伤组织诱导及分化
2.1 材料与方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 试剂及仪器
2.1.3 不同外植体的消毒时间筛选
2.1.4 愈伤组织诱导、继代增殖及分化培养基筛选
2.1.5 愈伤组织统计分析
2.1.6 冷冻切片观察愈伤组织的形成过程
2.2 结果与分析
2.2.1 不同消毒时间下双瓣茉莉外植体的污染率
2.2.2 不同培养基配方对茎段和叶片愈伤组织诱导率、生根率及出芽率的影响
2.2.3 茎段和叶片愈伤组织的诱导
2.2.4 冷冻切片观察愈伤组织的形成过程
2.3 讨论
第三章 茉莉胚性愈伤组织WOX基因家族成员表达特征
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 试剂及仪器
3.1.3 总RNA的提取及cDNA第一链的合成
3.1.4 WOX基因表达量检测
3.2 结果与分析
3.2.1 茉莉的茎段、3个月愈伤组织、5个月愈伤组织的总RNA的提取及检测
3.2.2 qRT-PCR引物的质量分析
3.2.3 WOX基因家族成员在三个时期内的表达模式
3.3 讨论
第四章 原位杂交检测WOX基因的表达部位
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 试剂及仪器
4.1.3 原位杂交探针片段的扩增
4.1.4 原位探针的地高辛标记
4.1.5 原位杂交探针的纯化
4.1.6 原位杂交探针的电泳检测
4.1.7 原位杂交探针的点膜检测
4.1.8 原位杂交材料的处理
4.1.9 原位杂交
4.2 结果与分析
4.2.1 原位杂交探针片段的扩增
4.2.2 原位探针的地高辛标记
4.2.3 原位杂交探针的点膜检测
4.2.4 JsWOX4和JsWOX1 mRNAs在脱分化细胞的检测
4.3 讨论
第五章 茉莉PK7WG2-JsWOX4、PK7WG2-JsWOX1植物表达载体构建
5.1 材料与方法
5.1.1 试剂、培养基、菌株
5.1.2 仪器
5.1.3 PCR扩增目的基因
5.1.4 目的片段纯化回收
5.1.5 Gateway方法构建表达载体
5.1.6 阳性克隆PCR验证
5.2 结果与分析
5.2.1 目的基因PCR产物鉴定及无胶纯化回收检测
5.2.2 入门载体构建
5.2.3 PK7WG2-JsWOX4、PK7WG2-JsWOX1植物表达载体和PK7WG2-GUS对照载体构建
5.3 讨论
第六章 茉莉愈伤组织JsWOX1/4基因转化及检测
6.1 材料与方法
6.1.1 植物材料
6.1.2 试剂
6.1.3 菌株与植物表达载体
6.1.4 质粒DNA转化农杆菌GV3103
6.1.5 植物表达载体转化茉莉愈伤组织
6.1.6 茉莉抗性愈伤组织GUS染色及GFP荧光检测
6.1.7 WOX基因在茉莉抗性愈伤组织中的表达水平检测
6.2 结果与分析
6.2.1 携带质粒农杆菌的阳性检测
6.2.2 茉莉愈伤组织抗性检测
6.2.3 茉莉愈伤组织的转化及其筛选
6.2.4 愈伤组织转化后GUS染色和GFP检测
6.2.5 愈伤组织过表达JsWOX1及JsWOX4对基因表达及形态的影响
6.3 讨论
第七章 总结与展望
7.1 主要结论
7.2 展望
参考文献
致谢
本文编号：3863534
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 双瓣双瓣茉莉概述
1.1.1 双瓣茉莉的生物学特征
1.1.2 双瓣茉莉的应用价值
1.1.3 双瓣茉莉的繁殖
1.2 木本植物组织培养再生途径
1.2.1 器官发生途径的植株再生
1.2.2 体细胞胚胎发生途径
1.3 WOX转录因子的研究
1.4 植物遗传转化的研究
1.4.1 遗传转化方法
1.4.2 转化受体材料的选择
1.4.3 农杆菌菌株的选择
1.4.4 遗传转化条件的优化
1.5 本研究的目的意义和内容
第二章 茉莉愈伤组织诱导及分化
2.1 材料与方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 试剂及仪器
2.1.3 不同外植体的消毒时间筛选
2.1.4 愈伤组织诱导、继代增殖及分化培养基筛选
2.1.5 愈伤组织统计分析
2.1.6 冷冻切片观察愈伤组织的形成过程
2.2 结果与分析
2.2.1 不同消毒时间下双瓣茉莉外植体的污染率
2.2.2 不同培养基配方对茎段和叶片愈伤组织诱导率、生根率及出芽率的影响
2.2.3 茎段和叶片愈伤组织的诱导
2.2.4 冷冻切片观察愈伤组织的形成过程
2.3 讨论
第三章 茉莉胚性愈伤组织WOX基因家族成员表达特征
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 试剂及仪器
3.1.3 总RNA的提取及cDNA第一链的合成
3.1.4 WOX基因表达量检测
3.2 结果与分析
3.2.1 茉莉的茎段、3个月愈伤组织、5个月愈伤组织的总RNA的提取及检测
3.2.2 qRT-PCR引物的质量分析
3.2.3 WOX基因家族成员在三个时期内的表达模式
3.3 讨论
第四章 原位杂交检测WOX基因的表达部位
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 试剂及仪器
4.1.3 原位杂交探针片段的扩增
4.1.4 原位探针的地高辛标记
4.1.5 原位杂交探针的纯化
4.1.6 原位杂交探针的电泳检测
4.1.7 原位杂交探针的点膜检测
4.1.8 原位杂交材料的处理
4.1.9 原位杂交
4.2 结果与分析
4.2.1 原位杂交探针片段的扩增
4.2.2 原位探针的地高辛标记
4.2.3 原位杂交探针的点膜检测
4.2.4 JsWOX4和JsWOX1 mRNAs在脱分化细胞的检测
4.3 讨论
第五章 茉莉PK7WG2-JsWOX4、PK7WG2-JsWOX1植物表达载体构建
5.1 材料与方法
5.1.1 试剂、培养基、菌株
5.1.2 仪器
5.1.3 PCR扩增目的基因
5.1.4 目的片段纯化回收
5.1.5 Gateway方法构建表达载体
5.1.6 阳性克隆PCR验证
5.2 结果与分析
5.2.1 目的基因PCR产物鉴定及无胶纯化回收检测
5.2.2 入门载体构建
5.2.3 PK7WG2-JsWOX4、PK7WG2-JsWOX1植物表达载体和PK7WG2-GUS对照载体构建
5.3 讨论
第六章 茉莉愈伤组织JsWOX1/4基因转化及检测
6.1 材料与方法
6.1.1 植物材料
6.1.2 试剂
6.1.3 菌株与植物表达载体
6.1.4 质粒DNA转化农杆菌GV3103
6.1.5 植物表达载体转化茉莉愈伤组织
6.1.6 茉莉抗性愈伤组织GUS染色及GFP荧光检测
6.1.7 WOX基因在茉莉抗性愈伤组织中的表达水平检测
6.2 结果与分析
6.2.1 携带质粒农杆菌的阳性检测
6.2.2 茉莉愈伤组织抗性检测
6.2.3 茉莉愈伤组织的转化及其筛选
6.2.4 愈伤组织转化后GUS染色和GFP检测
6.2.5 愈伤组织过表达JsWOX1及JsWOX4对基因表达及形态的影响
6.3 讨论
第七章 总结与展望
7.1 主要结论
7.2 展望
参考文献
致谢
本文编号：3863534
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