蝴蝶兰叶肉原生质体分离、融合及GFP瞬时表达研究

发布时间：2023-12-09 11:30

　　蝴蝶兰是具有较高观赏价值和经济价值的花卉,在国内外花卉市场深受欢迎。尽管常规杂交育种已培育出大量蝴蝶兰品种,但部分性状仍需通过其它途径进行改良。原生质体融合可以获得不同种属材料间遗传性状的融合,但目前该技术尚未成熟。此外,随着蝴蝶兰全基因组测序的完成,蝴蝶兰重要功能基因的后续分析及转移显得尤为重要。基因的瞬时表达是建立在获得高质量原生质体的基础上,研究基因结构和功能的重要手段,因此在蝴蝶兰中建立稳定的原生质体瞬时表达体系将使蝴蝶兰在生物学相关领域研究中发挥重要作用。本研究以蝴蝶兰无菌苗幼嫩叶片为材料,采用酶解法对蝴蝶兰叶肉细胞原生质体的分离及融合条件进行研究,并利用PEG介导法将外源基因转化到原生质体中进行瞬时表达分析。通过对影响蝴蝶兰叶肉细胞原生质体分离、融合以及基因瞬时表达的相关因素进行了研究,初步建立了蝴蝶兰叶肉细胞原生质体分离、融合及瞬时表达体系,为进一步开展细胞与分子生物学操作提供参考。试验结果如下:1.蝴蝶兰叶肉细胞原生质体分离条件:以蝴蝶兰无菌苗幼嫩叶片为材料进行原生质体的分离,通过正交试验研究了纤维素酶OnozukaR-10、离析酶OnozukaR-10、甘露醇浓度与酶...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
引言
第一部分 文献综述
    1 蝴蝶兰原生质体研究
    2 植物原生质体研究进展
        2.1 植物原生质体的分离
        2.2 植物原生质体融合
        2.3 植物原生质体的瞬时表达
    3 本研究的目的与意义
第二部分 试验研究
    第一章 蝴蝶兰叶肉细胞原生质体分离条件研究
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2 结果与分析
            2.1 蝴蝶兰叶肉细胞原生质体的分离与活力检测
        3 讨论
        4 结论
    第二章 蝴蝶兰叶肉细胞原生质体融合条件研究
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2 结果与分析
            2.1 PEG种类对蝴蝶兰原生质体融合的影响
            2.2 PEG浓度对蝴蝶兰原生质体融合的影响
            2.3 PEG处理时间对蝴蝶兰原生质体融合的影响
        3 讨论
        4 结论
    第三章 蝴蝶兰原生质体瞬时表达体系的建立
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2. 结果与分析
            2.1 PEG浓度对转化的影响
            2.2 PEG4000处理时间对转化的影响
            2.3 质粒DNA含量对转化的影响
            2.4 原生质体的密度对转化的影响
            2.5 瞬时表达结果
        3 讨论
        4 结论
全文结论
参考文献
致谢



本文编号：3871485