CaSGT1和GaSRC2-1互作及其在PcINF1/CaSRC2-1激活辣椒免疫反应中的作用分析

发布时间：2023-12-10 10:46

　　前期本实验室从辣椒疫霉cDNA文库中分离获得了一个elicitin家族成员PcINF1的全长cDNA,发现该蛋白可与辣椒SRC2-1蛋白结合,促发辣椒叶片产生HR(hypersensitive response)细胞坏死,并使辣椒防御反应相关标记基因上调,但是其内在机制并不清楚。本研究在此基础上进一步分析发现CaSGT1参与PcINF1/CaSRC2-1诱导的免疫反应：通过酵母双杂交系统发现CaSRC2-1与CaSGT1之间存在互作,并进一步通过双分子荧光互补(BiFC)和免疫共沉淀分析(co-IP)得到证实。在辣椒植株叶片上接种疫霉,或同时瞬间表达PcINF1/CaSRC2-1可使CaSGT1的转录表达显著上调,病毒介导CaSGT1沉默(CaSGT1-VIGS)可显著降低PcINF1/CaSRC2-1瞬间表达激活的辣椒叶片细胞HR坏死、H2O2积累、防御反应相关标记基因转录表达的上调,且CaSGT1和CaSRC2-1共同沉默比其中任何一个基因单独沉默更能降低接种疫霉导致的HR细胞坏死和防御反应相关基因表达。此外,还发现CnSGT1和cnSRC2-1沉默能降低彼此瞬间表达激活的HR反应...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 SGT1蛋白结构与功能的研究进展
    1.2 C2功能域的研究与进展
    1.3 SRC2-1蛋白结构与功能的研究进展
    1.4 elicitin的研究进展
    1.5 本项目研究的意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 植物材料和病原体侵染
        2.2.2 辣椒总RNA提取及反转录
        2.2.3 实时定量PCR分析
        2.2.4 双分子荧光互补(BiFC)分析
        2.2.5 构建Gateway相容LUC载体和测LUC活性
        2.2.6 GUS酶活测定
        2.2.7 酵母双杂交分析
        2.2.8 免疫共沉淀(co-IP)分析
        2.2.9 农杆菌介导的瞬间超表达和亚细胞定位分析
        2.2.10 病毒介导的基因沉默(VIGS,virus induced gene silence)
        2.2.11 电导率测定
        2.2.12 DAB和台盼蓝染色
3 结果及分析
    3.1 CaSGT1与CaSRC2-1互作
    3.2 CaSGT1在应对辣椒疫霉接种时的转录表达
    3.3 在辣椒中将CaSGT1和CaSRC2-1基因共同沉默与单个基因沉默相比在抵御辣椒疫霉的免疫反应中有很大程度上的减弱
    3.4 在辣椒中瞬间共表达CaSGT1和CaSRC2-1使得细胞坏死和防御反应增强
    3.5 用VIGS和瞬间超表达相结合的方式分析CaSGT1和CaSRC2-1在辣椒免疫诱导中的作用
    3.6 CaSGT1在应对PcINF1/CaSRC2-1瞬间共表达时的转录表达
    3.7 CaSGT1沉默后使得PcINF1/CaSRC2-1激发的免疫反应减弱
    3.8 CaSGT1沉默对PcINF1/CaSRC2-1互作的影响
    3.9 PcINF1瞬间超表达和疫霉接种对CaSRC2-1/CaSGT1互作的影响
4 讨论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3872361