香蕉束顶病毒（BBTV）侵染性克隆载体构建及Rep/RepA作用研究

发布时间：2023-12-28 17:22

　　香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是矮缩病毒科(Nanaviridae)香蕉束顶病毒属(Babuvirus)成员,其基因组由6个大小约1kb的环状ssDNA组成,有的株系含有1-3个不同数量的卫星组分。BBTV基因组中各组分除含有同源性很高的调控区外,几乎每个组分含有1个开放阅读框架(ORF)。BBTV各组分编码不同的蛋白,行使不同的功能,其中DNA1编码Rep蛋白,卫星组分(S2、S4)编码复制相关蛋白(RepA)。研究表明,DNA1编码的Rep蛋白和卫星组分编码的RepA蛋白在病毒基因组滚环复制中起作用,在其颈环结构区域进行剪切和连接,产生病毒基因组的各个环状单链组分。已有研究发现DNA1编码的Rep蛋白能够对DNA1、DNA3、DNA5进行剪切和连接:卫星组分(S2、S4)编码的RepA蛋白能够对自身组分起作用,进行剪切和连接,产生卫星组分。但是Rep和RepA对DNA2、DNA4、DNA6等其他组份的复制也还不是很清楚。目前针对BBTV各组分基因编码的蛋白作用尚不明确,其致病机理,与寄主间的相互作用等相关研究也不清楚。为了进一步研究BBTV...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 香蕉束顶病毒概述
        1.1.1 香蕉束顶病毒及其引起的病害
        1.1.2 香蕉束顶病毒分子生物学研究进展
    1.2 植物病毒侵染性克隆的研究进展
        1.2.1 侵染性克隆的研究
        1.2.2 侵染性克隆常规构建方法
        1.2.3 植物病毒侵染性克隆研究的生物学意义
    1.3 Rep/RepA研究进展
    1.4 本研究目的意义
    1.5 本研究技术路线
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 生物信息学分析工具
    2.2 方法
        2.2.1 香蕉总DNA提取
        2.2.2 引物设计
        2.2.3 多拷贝序列PCR扩增
        2.2.4 PCR产物胶回收
        2.2.5 胶回收产物的连接、转化
        2.2.6 菌液PCR筛选阳性克隆
        2.2.7 质粒提取
        2.2.8 侵染性克隆载体的构建
        2.2.9 重组质粒DNA转化农杆菌EHA105
        2.2.10 瞬时转化烟草
        2.2.11 瞬时转化烟草检测
3 结果与分析
    3.1 香蕉总DNA提取
    3.2 BBTV基因组份多拷贝克隆
    3.3 BBTV各组分多拷贝酶切验证及序列测序分析
        3.3.1 BBTV各组分酶切验证
        3.3.2 BBTV各组分多拷贝克隆测序分析结果
        3.3.3 BBTV侵染性克隆载体酶切验证结果
    3.4 BBTV侵染性克隆检验
        3.4.1 BBTV DNA1瞬时转化烟草
        3.4.2 BBTV DNA1和卫星DNA混合侵染烟草
        3.4.3 BBTV DNA1与各组分混合侵染烟草
        3.4.4 BBTV卫星组分与各组分混合侵染烟草
    3.5 本研究需进一步解决的问题
4 讨论
    4.1 一步法扩增BBTV各组分多拷贝
    4.2 农杆菌介导瞬时转化烟草
    4.3 Rep/RepA对BBTV各基因组的调控
5 结论
参考文献
附录
发表文章
致谢



本文编号：3875849