羽衣甘蓝PCNA相互作用蛋白的筛选与分析

发布时间：2024-02-14 02:14

　　增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在分裂旺盛的细胞内具有很强的活跃性,主要参与细胞周期调控、DNA的复制、DNA损伤修复及表观遗传修饰。经差异蛋白质组学研究发现,PCNA的含量与柱头发育成负相关,在柱头发育的早期表达量较高,随柱头的发育表达量下降。本试验利用以CytoTrap细胞质酵母双杂交系统筛选PCNA相互作用蛋白、5’RACE克隆、并利用实时荧光定量PCR方法分析基因的表达等。获得主要结果如下:(1)分别以羽衣甘蓝的PCNA1和PCNA2基因为模板,构建酵母pSos-PCNA1和pSos-PCNA2诱饵表达载体,进行酵母双杂交自激活检测。结果发现PCNA1和PCNA2不存在自激活现象,可以进行蛋白质相互作用的筛选。(2)以CytoTrap细胞质酵母双杂交系统检测PCNA1与PCNA2之间的相互作用,结果显示,PCNA1与PCNA2不仅与自身发生相互作用在它们之间也存在相互作用。(3)以pSos-PCNA1和pSos-PCNA2为诱饵载体,利用CytoTrap细胞质酵母双杂交系统,通过共转化的方法对羽衣甘蓝柱头酵母cDN...

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【部分图文】：

图１－２?Ｓｏｓ招募系统原理图??于Ｓｏｓ于互用，因此可于

体中，Ｓｏｓ蛋白可以代替Ｃｄｃ２５通过肉豆蓮信号（Ｍｙｒ，定??位于细胞膜）激活Ｒａｓ蛋白，使酵母菌在３７?°Ｃ生长。该系统中将目标蛋白与Ｓｏｓ蛋白??融合，将被检测蛋白与肉豆蔻信号融合，定位于细胞膜，如果目标蛋白与被检测蛋白相??互作用，则Ｒａｓ信号被激活，酵母细胞可在３７?°....

图２－２?ｐＭｙｒ载体??（４）菌种：ＤＨ５ａ??

ＡＧＣＴＴＣＧｎＴＣｉ??ＰＣＮＡ２－Ｓａｌ－Ｘ?ＣＣＧＴＣＧＡＣＴＴＡＧＧＣＡＴＴＡＧＴＧＴＣＴＴＣ??ｐＭｙｒ?３’?ＣＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＧＣＧＴＧＡＣＡＴ??ｐＭｙｒ?５，?ＡＣＴＡＣＴＡＧＣＡＧＣＴＧＴＡＡＴＡＣ－３??（３）载体：ｐＳｏｓ?载体、ｐＭｙｒ?载体（Ｓｔｒ....

图２－４?ｐＳｏｓ－ＰＣＮＡｌ双酶切电泳图??（Ｍ：ＤＬ２０００；ｌ：ＰＣＡ＾ｉ）

?各?３００?ｎｅ??５?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ１??６?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ２??７?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ１?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?阴性对照??８?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?阴性对照??２．３结果分析??....

图２－５?ＰＣｉＶｆ基因ＰＣＲ电泳图

?各?３００?ｎｅ??５?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ１??６?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ２??７?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ１?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?阴性对照??８?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?阴性对照??２．３结果分析??....

本文编号：3897581