番茄SpWRKY6转录因子的抗病功能研究

发布时间：2024-05-27 19:04

　　致病疫霉引起的晚疫病严重危害番茄的生产,常造成巨大的经济损失。目前防治番茄晚疫病的方法主要有喷施化学农药和传统的杂交育种方法,长期使用化学农药会对环境和人体造成伤害,而传统的杂交育种方法培育抗性品种,存在着周期较长等缺点。随着生物技术的发展,利用基因工程的手段对番茄进行改良,获得优良的抗病品种,已成为番茄分子育种的新策略和新方法。研究发现,WRKY转录因子在植物抗病反应中起到了关键的调控作用,但是在番茄中关于它的研究还鲜有报道。因此筛选番茄中参与抗病的WRKY转录因子,解析其作用机制,不仅可以为培育抗性番茄品种提供候选基因,也可为以后的分子育种工作提供了理论依据。本实验室前期通过电子克隆技术获得了SpWRKY6基因。生物信息学预测表明该蛋白的分子量为182.98 kDa,等电点为4.90,由739个氨基酸组成的不稳定疏水蛋白,无信号肽和跨膜结构域,亚细胞定位分析表明该蛋白可能位于细胞核;含有两个保守的WRKY结构域且锌指结构为C2H2,属于第一家族；对其进行启动子分析表明该基因上游启动子区域含有生物及非生物胁迫应答的元件；利用genevestigator在线软件对其响应元素进行预测表明...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．３破和Ａ：伽基因的溶解曲线??巧．２．３?Ｍｅｌｔｉｎｇ?ｃｕｒｖｅｓ?ｏｆ?成?ａｎｄ?ｙｋｄ巧??

图２．４帮Ｗ／化７６和诚基因的标准曲线??Ｆｉｇ．２．４?Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅｓ?ｏｆ?ＳｐＷＲＫＹ６?ａｎｄ?Ａｃｔｉｎ??

２．３．６在番茄不同纪织中的表达分巧??抗病番茄品种Ｌ３７０８幼苗生长到五叶期，Ｌ：ｉ？根、茎和叶为材料，采用ｑＲＴ－ＰＣ民方??法对却Ｗ７化ｒ＜５基因的组织特异性进行分析。如图２．５所示，表明该基因在叶中表达量??较高，在茎巧表达量较低。??１．６?Ｊ?１??ａ??＾１１?■?....

图２．７却基因在水杨酸和荣莉酸甲醋处理下的表达谱??Ｆｉｇ．２．７?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｏｆ?毎?ｉｎ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ?化?ＳＡ?ａｎｄ?ＭｅＪＡ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ??

?０?３?１２?２４?３６?４８?７２?９６??Ｔｉｍｅ?（ｈ）??图２．６毎Ｗ化樹：Ｍ基因在致病疫霉和灰霉菌处理下的表达谱??打ｇ．２．６?Ｅｘｐｒｅ巧ｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｏｆ?毎）味７ＪＫＴ６?ｉｎ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ?化戶．１’打典別ａｎｊ?ａｎｄ?瓦?ｃｍｅｒｅａ?ｉ....

图３．１病毒诱导基因沉默片段的扩增??Ｆｉｇ．３．１?Ａｉｎｐｌｉｆｉｃａｔｉｏ打?ｏｆ?ＶＩＧＳ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??

３．?３结果与分析??３．?３．?１成ＷＲｉｉ：化基因在沉默植株中表达量的检测??反转录后的瓜ＮＡ为模板，利用特异性引物进行ＰＣ民扩增（图３．１），目的片段??与ｐＭＤ?１９－Ｔ?Ｓｉｍｐｌｅ载体连接后的重姐质粒进行ＰＣ民和酶切鉴定（图３．２），与预期的??目的片段大致相符，经测....

本文编号：3982980