苹果腐烂病菌VmHMG7基因的分离及功能分析

发布时间：2024-05-28 20:25

　　苹果腐烂病是我国苹果产业的重大生物灾害,发生普遍,为害严重,Valsa mali var.mali是引起苹果腐烂病的主要病原真菌,深入研究病菌的生长发育及分子致病机制可为病害的科学防控提供理论依据,分离克隆和调控病菌生长发育和致病相关基因,进而研究这些基因的功能,可揭示腐烂病菌生长发育及致病分子机制。本研究以ATMT介导的突变体库中已筛选出的菌落形态、生长和致病性均出现变异的突变体FL550为出发菌株,通过侧翼序列扩增,分离克隆了苹果腐烂病菌HMG(VmHMG7)基因,利用生物信息学方法,从苹果腐烂病菌全基因组数据库中鉴定出HMG-box家族,利用MEGA5软件对基因家族进行了系统进化分析,利用MapDRAW及GSDS方法进行了基因家族成员的结构及染色体定位;利用融合PCR技术将VmHMG7基因上下游片段与及潮霉素筛选标记基因(hygromycin phosphotransferase gene,HPH)构建敲除载体,应用PEG-CaCl₂介导原生质体,将敲除载体转化到野生型菌株中,然后经过潮霉素的筛选、PCR扩增和Southern杂交,获得了敲除突变体。将敲除前...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1经典的HMG蛋白的分类Figure1.1ClassificationofclassicalHMGproteins

苹果腐烂病菌VmHMG7基因的分离及功能分析状态，如图1.1（Cateetal.，2010）。表1.1HMG-box结构域中的保守序列Table1.1ConservedsequenceofHMG-boxdomains亚家族结构域一致核心序列分布MA....

图1.2柄孢霉中HMG-box基因的遗传网络（引自AitBenkhalietal.，2013）

苹果腐烂病菌VmHMG7基因的分离及功能分析遗传分析显示，该网络还调控不受交-box成员在真菌中的重要作用，12个HMG5和SpSte11是交配型基因的保5.5亿年前进化分分离，两种HMG-box的性别决定中发挥重要作用。P.aseri因子形成的HMG-bo....

图2.1敲除载体的构建及突变体PCR验证示意图

图2.1敲除载体的构建及突变体PCR验证示意图Fig.2.1ConstructionoftheknockoutvectorandthemutantdetectionbyPCRCTAB法快速提取突变体DNA，方法见步骤2.2.2。用四对引物（....

图3.1hiTAIL-PCR产物电泳条带Fig.3.1ElectrophoreticbandofhiTAIL-PCR

图3.1hiTAIL-PCR产物电泳条带Fig.3.1ElectrophoreticbandofhiTAIL-PCR分别代表第二三步反应产物，Marker为DM2000maker，白线指示条带为因的分析体的特异性片段切胶回收，连接至pMD18-T载体，单....

本文编号：3983684