草莓PHR1基因的克隆与功能分析

发布时间：2024-06-01 23:26

　　植物的生长发育离不开磷元素,且磷在生物体内发挥重要作用。植物处于低磷状态时会出现生长发育不良的现象。PHR 1(Phosphate Starvation response 1)是植物参与磷调控的核心转录因子,在植物应对磷饥饿过程中扮演重要角色。PHR1的作用在很多植物中均已经得到了较清晰的研究。但其在草莓中作用尚不清楚。本研究分离了草莓PHR1基因全长序列,构建其过表达载体,并利用农杆菌介导的转化法获得森林草莓(Ruegen)和拟南芥的转基因植株,为揭示草莓PHR1功能和作用机制奠定基础。主要研究结果如下：1.从二倍体森林草莓和八倍体凤梨草莓中克隆出了PHR1基因编码区全长序列：二倍体森林草莓PHR1基因全长1542bp,凤梨草莓PHR1基因全长1524bp,凤梨草莓PHR1基因长度较短的原因是提前出现终止子。对序列进行分析发现, 二者均属于MYB-CC蛋白家族,具有应对磷变化的调节作用。2.以植物表达载体pRI 101 AN-GUS为基础载体,利用lde I、Eco RⅠ限制性内切酶,将草莓PHR1基因整合到pRI 101 AN-GUS载体上,获得了PHR1基因的过量表达载体,分别命...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图５?扩增条带??１－３：?’Ｒｕｅｇｅｎ’：?４－６：?‘艳丽Ｉ??

Ｗ?ＬＯＣ１０１２９９３３７?为模板，设计全长引物?ＰＨＲ１－Ｆ／ＰＨＲ１－Ｒ。??ＷＰＨ民１－Ｆ／ＰＨＲ１－Ｒ?（表２）为引物，通过ＰＣ艮扩增，在’Ｒｕｅｇｅｎ’、＇艳丽＇中各得??到一条约１．５ｋｂ的特异条带（图５），该条带与ＬＯＣ１０１巧９３巧序列的ＣＤＳ区长度相近，??于....

图６菌ＰＰＣ民扩增条带??７－９：?’Ｒｕｅｇｅｎ’；?１０－１２：?‘艳丽’??Ｆｉ．６?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅ化ｒａｍ?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉｕｍ?尸／／ｉ？／??

?■??筛选，选择色白而圆润的单一菌落应用ＰＣ艮实验进行鉴定（图６），将结果鉴定为阳性??克隆的菌液摇茜．，之后委托北京金唯智生物公司进行测序。??测序结果表明森林草菩’Ｒｕｅｇｅｎ’的基因ＣＤＳ长度为１５４２ｂｐ，栽培草霉＇艳??丽＇７＾谢？７基因ＣＤＳ长度为１５２４ｂｐ，通过....

图８草霉戶／／度７基因结构示意图??Ｆｉ．８?Ｔｈｅ?ｅｎｅ?ｓｔｒｕｃｔｒａｌ?ｄｉａｒａｍ?ｏｆ?ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ?ＰＨＲｌ??

Ｆｉｇ．９?Ｔｈｅ?Ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔ?ｏｆ?ＭＹ艮－ＣＣ?ｄｏｍａｉｎ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｐｅｃｉｅｓ??根据测序结果，在ＮＣＢＩ?Ｂｌａｓｔ比对发现：草萄中的Ｐ／／Ｊ？／基因位于２号染色体，有；－??９个外显子，８个内含子，如....

图１３定量引物筛选??Ｆｉｇ．ｌ３?Ａ１?化?ｍａｔｉｖｅ?０?則民Ｔ－ＰＣ?民?Ｐｒｉｍｅｒｓ??

?ｐ＿＿图１２几紳植物的户饼？／蛋白质进化树分析??Ｆｉｇ．?１２?Ｐｒｏｔｄ打?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?杠ｅｅ?ｆｂｒ?ｓｏｍｅ?ｐｌａｎ化??毒／基因表达分析??定量引物筛选??据测序回来的序列，参照定量引物设计原则，设计两对定量引物（见附录表１），??名为引物１／引物２，....

本文编号：3986534