利用VIGS对辣椒抗疫病候选基因Ca21394的功能分析

发布时间：2024-06-03 20:06

　　辣椒(Capsicum annuum L.)是一种受人们喜爱的蔬菜,在全世界范围内广泛种植。辣椒疫病由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起,在辣椒的整个生长阶段都有可能发生,可导致成片辣椒死亡,严重影响了辣椒的生产。实践证明,明确作物的抗病基因并用于选育抗病品种,才能从根本上预防某种病害的发生。本实验室前期研究结果显示,Ca21394为辣椒抗疫病的候选基因,但未进行功能验证;病毒诱导的基因沉默(VIGS)是一种快速沉默目的基因的方法,正在越来越多地用于植物候选基因的功能分析。本研究以辣椒抗疫病材料’G43’为试验材料,利用VIGS技术,分析Ca21394是否参与辣椒对辣椒疫霉菌的抗性反应。研究结果如下:构建了 VIGS重组载体pTRV2:Ca21394。采用对寄主影响较温和的烟草脆裂病毒(TRV)为病毒载体,以辣椒叶片DNA为模板,在Ca21394基因序列5’端的一个外显子区域内设计引物,克隆得到大小为438 bp的目的片段,经过双酶切检测、测序验证序列正确后,在pTRV2载体的XbaI和BamHI双酶切位点间插入该目的片段,完成pTRV2:Ca21394重组载体...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?Ｇ４３叶片ＤＮＡ提取电泳检测??

２．２．１辣椒叶片ＤＮＡ提取??按照ＤＮＡ提取试剂盒的操作步骤，提取抗疫病材料‘Ｇ４３’的辣椒叶片ＤＮＡ，??并进行电泳检测，结果如图２－１所示，得到清晰的条带，表明已经得到所需的ＤＮＡ，??可用其进行下一步实验。??Ｍ?１?２?３??２０００?ｂｐ??７５０?ｂｐ??图２－１?....

图２－３目的片段与ｐＥＡＳＹ－Ｔ３载体连接转化后ＰＣＲ检测??

??片ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，电泳检测结果显示５００?ｂｐ下方有清晰的条带（图２－２），??与预期结果一致。测序结果表明，目的片段与Ｃａ２１３９４的ＣＤＳ序列同源片段完全一??致，即该目的片段不包含内含子，可用于下一步的重组载体构建。??Ｍ?１?２?３??图２－２?Ｃａ２１３....

图２－２?Ｃａ２１３９４基因扩增电泳检测??

??片ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，电泳检测结果显示５００?ｂｐ下方有清晰的条带（图２－２），??与预期结果一致。测序结果表明，目的片段与Ｃａ２１３９４的ＣＤＳ序列同源片段完全一??致，即该目的片段不包含内含子，可用于下一步的重组载体构建。??Ｍ?１?２?３??图２－２?Ｃａ２１３....

图２－５?ｐＴＲＶ２和目的片段质粒提取电泳检测??

活化含ｐＴＲＶ２质粒的大肠杆菌，利用ｐＴＲＶ２－Ｆ／Ｒ引物进行ＰＣＲ扩增检测，得到??的条带大小应为２８１?ｂｐ，电泳检测结果表明，在２００?ｂｐ条带上方可看到单一清晰的条??带（图２－４），与预期结果一致，说明ｐＴＲＶ２质粒可以用于后续试验。??Ｍ?１?２?３?４??ｊｍ??图....

本文编号：3988436