基于蛋白组学技术的松属素对柑橘青霉抑菌机理研究

发布时间：2024-07-05 05:19

　　黄酮化合物具有多样的生理活性和潜在的药用价值,其中C5-OH和C7-OH是重要的抗菌活性基团,研究表明,松属素能显著抑制意大利青霉呼吸作用并诱发细胞程序性死亡,已有呼吸抑制试验证明线粒体呼吸电子传递链酶复合物I,IV和V活性会直接被松属素抑制;松属素抑制青霉的关键部位,可能处于线粒体呼吸链上,进而导致细胞能量代谢障碍,诱发细胞凋亡或程序性坏死。本文以柑橘青霉病的主要病原菌意大利青霉为指示菌,使用被证明抗菌活性最强的5,7二羟基黄酮类化合物松属素,借助蛋白组学IRAQ技术,来研究松属素不同时间处理后,引起的意大利青霉蛋白表达差异,以及通过分子模拟作为参考,呼吸链复合物作为靶点的可能机制,及松属素引起程序性死亡的探究。主要研究结果如下:1.松属素处理后,意大利青霉的氧化磷酸化通路、TCA循环产生多种1.2倍以上表达差异的蛋白,其中线粒体呼吸链酶复合物I,IV和V,及呼吸相关酶琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶产生显著差异,导致导致菌体能量代谢紊乱;程序性死亡过程中某些指示蛋白,比如Apoptosis-inducing factor、凋亡BAX inhibitor蛋白、肽酰脯氨基顺反异构化的酶(CY...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 绪论
    1.1 前言
    1.2 5,7-二羟基黄酮的抑菌机制
    1.3 真菌细胞程序性死亡途径与机制
    1.4 蛋白组及iTRAQ技术
    1.5 同源建模与分子对接
    1.6 本研究的目的与意义
    1.7 研究的主要内容
第二章 松属素处理对意大利青霉的蛋白组变化研究
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 试剂
        2.2.2 菌种
        2.2.3 样品准备
        2.2.4 实验流程
    2.3 结果与分析
        2.3.1 差异蛋白统计
        2.3.2 差异蛋白的Pathway富集分析
        2.3.3 氧化磷酸化通路
        2.3.4 TCA循环
        2.3.5 程序性死亡相关蛋白
        2.3.6 差异倍数在 1.4 倍以上的其他蛋白
    2.4 讨论
第三章 松属素处理后青霉菌相关差异蛋白的表达验证
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 仪器设备
        3.2.2 试剂
        3.2.3 实验步骤
    3.3 结果与分析
        3.3.1 MRM实验方法的建立
        3.3.2 MRM鉴定蛋白结果
        3.3.3 qPCR实验结果
    3.4 讨论
第四章 松属素与靶酶结合能力的预测及诱发死亡机制的探讨
    第一节 呼吸链酶蛋白同源建模与分子对接
        4.1 引言
        4.2 材料与方法
            4.2.1 材料收集
            4.2.2 试验方法
        4.3 结果与分析
            4.3.1 同源模建
            4.3.2 分子对接
        4.4 讨论
    第二节 染色法判断松属素诱导的程序性死亡
        4.1 引言
        4.2 材料与方法
        4.3 结果与分析
        4.4 讨论
参考文献
致谢



本文编号：4001100