根癌农杆菌介导的巨大口蘑遗传转化体系的构建

发布时间：2025-02-08 16:11

　　 以巨大口蘑菌丝为受体材料,利用含有双元质粒plasmid4的根癌农杆菌EHA105介导,首次成功建立了巨大口蘑的遗传转化体系。通过潮霉素抗性筛选、PCR鉴定和绿色荧光蛋白的检测,表明潮霉素抗性基因(Hyg)已经整合到巨大口蘑基因组中,增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)在巨大口蘑菌丝中获得表达,并能够稳定遗传。本研究建立了农杆菌介导的巨大口蘑遗传转化体系,为今后巨大口蘑的基因功能研究奠定了基础。

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【部分图文】：

图1 双元载体plasmid4图谱

巨大口蘑菌株SCAU4由华南农业大学食品学院505实验室保存；大肠杆菌DH5α感受态、根癌农杆菌EHA105感受态购于上海唯地生物技术有限公司；双元载体plasmid4由福建农林大学谢宝贵教授馈赠，质粒图谱见图1。1.1.2酶、引物和化学试剂：

图2 巨大口蘑菌丝在不同潮霉素浓度的PDA平板上的生长情况

在转化过程中，采用一定浓度的Cef可以抑制农杆菌的生长，然而并不清楚其是否会影响巨大口蘑菌丝的生长。观察结果显示巨大口蘑菌丝在Cef供试浓度的培养基中均能正常生长（图3），其生长速度和对照组没有明显差异，说明此浓度范围下不会影响菌丝生长。Cef对农杆菌的毒性试验发现当Cef浓度大....

图3 不同浓度的头孢噻肟霉素对巨大口蘑菌丝生长的影响

图2巨大口蘑菌丝在不同潮霉素浓度的PDA平板上的生长情况2.3质粒转化根癌农杆菌

图4 质粒plasmid4菌落PCR鉴定

采用冻融法将质粒plasmid4转化根癌农杆菌，获得单菌落的转化子。Hyg基因的PCR检测结果与目的基因大小一致，表明plasmid4成功转入根癌农杆菌中，可用于后续的转化实验（图4）。2.4根癌农杆菌介导的巨大口蘑菌丝遗传转化

本文编号：4031625