生物质热解液和芽孢杆菌发酵产物对白菜菌核菌抑制作用研究

发布时间：2020-04-05 16:13

【摘要】：为了探究生物质热解液及微生物发酵产物在绿色农产品贮藏与加工中的应用,减少化学农药残留,本文通过生长速率法分别测定了生物质热解液和芽孢杆菌发酵产物对白菜菌核菌的抑菌率,并进行了复合处理试验,通过HPLC和LC-MS-MS对芽孢杆菌发酵产物的抑菌物质进行了探究,并进行了生物质热解液和类芽孢杆菌SP-17的活体抑菌试验。抑菌试验结果表明生物质热解液对白菜菌核菌具有良好的抑制效果,EC50值为0.76%,最小抑菌浓度为1.82%,最小杀菌浓度为2.22%。枯草芽孢杆菌SP-7、甲基型芽孢杆菌SP-8、类芽孢杆菌SP-17、地衣形芽孢杆菌(15833)标3发酵产物对白菜菌核菌也具有一定的抑制作用,抑菌率分别为60.47%、59.30%、60.89%、67.57%。复合处理试验结果表明生物质热解液与SP-7、SP-8、SP-17、标3发酵产物分别复合使用时对白菜菌核菌的抑制均具有一定的增效作用。生物质热解液和SP-7发酵产物最佳复合比例为3:1或2:1,抑菌率分别为59.35%、57.64%,两者并无显著性差异(p0.05),与生物质热解液和SP-7发酵产物单独处理相比,3:1复合处理组的抑菌率分别高出14.79个百分点和23.76个百分点,2:1复合处理组的抑菌率分别高出13.08个百分点和22.05个百分点。生物质热解液和SP-8、SP-17、标3发酵产物最佳复合比例分别为1:2、1:1、3:1,抑菌率分别为60.68%、91.75%、64.63%,与生物质热解液和发酵产物单独处理时的抑菌率相比,分别高出9.17和35.10个百分点、49.22和62.81个百分点、26.78和40.41个百分点。HPLC和LC-MS-MS对芽孢杆菌发酵产物中抑菌物质分离鉴定结果表明,SP-7和SP-8发酵产物中可能含有C15IturinB同分异构体或构象异构体,分子量在1097.1～1097.4之间。SP-17发酵产物中含有3种Surfactin同系物,同时可能含有C15IturinB。其中A物质存在分子量为1008.5、1097.3的质谱峰,可能为C13SurfactinA 或 C14SurfactinB 和 C15IturinB。B 物质存在分子量为 1022.5、1097.0的质谱峰,C物质分子量为1022.7,B、C物质可能为C14SurfactinA或C15SurfactinB或C14SurfactinC,但B物质也可能为C15IturinB。D物质分子量为1036.8,可能为 C15SurfactinC。活体抑菌试验结果表明生物质热解液和SP-17复合使用对白菜菌核菌具有一定的防治效果,优于生物质热解液单独处理组和对照组,处理5 d后,复合处理组病情指数为49.79%,防治效果为32.78%。
【图文】：

６７．５７逡逑ＬＪＬＪＬＪ逡逑图３．４芽孢杆菌发酵产物对白菜菌核菌抑菌率的测定逡逑Ｆｉｇ．３．４邋Ｔｈｅ邋ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ｂａｃｉｌｌｕｓ邋ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ａｇａｉｎｓｔ邋Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ邋ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ逡逑１５逡逑

图３．１３为Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ标准品的ＨＰＬＣ色谱图，从图可以看出标准品有多个色逡逑谱峰，主要的峰有５个，说明即使是标准品也不是单一的物质，而是由许多逡逑Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ同系物组成，主要色谱峰保留时间在４？１０邋ｍｉｎ之间。图３．１４－３．１６分别逡逑为８？－７、３卩－８、５？－１７的册１＾色谱图，在４？１0１１１丨１１内，３个样品均有色谱峰逡逑出现。具体保留时间和峰面积如表３．６所示，从表中可以看出３个样品和标准品逡逑保留时间基本一致，个别峰保留时间不完全一致，但相差不超过３０邋ｓ。因此推测逡逑３个样品粗提物中可能含有表面活性素物质，需要进一步采用液相质谱进行分逡逑析。收集粗提物洗脱液，经旋转蒸发、冷冻干燥后用于质谱分析。逡逑１邋00■逦ｊＳ逡逑：！逦１邋ｇ逦逡逑４．０逦５．０逦６．０逦７．０逦６０逦９０逦１０．０逦１１０逦１２．０逦１３．０逦１４．０逦ｍｎ逡逑图３．１３邋Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ标准品ＨＰＬＣ色谱图逡逑Ｆｉｇ．３．１３邋ＨＰＬＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ逡逑ｎｊＶＷＩＯ）＾逡逑＜ＢｎｒａＴＡ３ＴＯ５ｎ逡逑ｉ邋ｉｌ邋ｉ邋Ｉ逡逑４．０逦５．０逦６０逦７．０逦８．０逦９０逦１００逦１１．０逦１２０逦１３．０逦１４０逦ｍｒ逡逑图３．１４样品ＳＰ－７邋ＨＰＬＣ色谱图逡逑Ｆｉｇ．３．１４邋ＨＰＬＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：TK6;TQ920.1

【参考文献】

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本文编号：2615230