长白山虫草真菌转化稀有人参皂苷菌株的筛

发布时间：2020-06-06 05:13

【摘要】：人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是我国的名贵传统中药,其主要活性成分人参皂苷单体在药材及提取物中含量不同,其药理活性也有差异,人参中含量极少的稀有皂苷在抗肿瘤、降血糖、抗衰老等方面效果显著,如何获得大量稀有人参皂苷也一直是中外研究人员的研究热点。本次研究课题主要通过微生物转化法,以长白山野生虫草属真菌无性型菌株对人参粗提总皂苷进行液体发酵,并对转化过程中β-D-葡萄糖苷酶的活性进行检测、优化转化条件、验证转化路径,对后期产业化发展提供思路,提高人参产业附加值。1.利用微波辅助纤维素复合酶的方法,获得原人参二醇型、三醇型皂苷混合物。其中包括人参皂苷Re、Rb_1、Rg_1、Rd等底物。2.从野生虫草真菌标本获得性状稳定的虫草菌株,经过β-D-葡萄糖苷酶产酶实验,筛选出5株酶活力较好的菌株,其中菌株ZZ0501.sp产酶能力最强。3.对菌株产酶条件进行优化,通过单因素及响应面法优化发酵条件,得出最佳产酶条件为:初始pH7.0,培养温度22℃、碳源添加量1%、氮源添加量0.3%、装液量45%、120r/min培养120h,酶活为36.76U/mL。在此条件下酶活力从基础产酶培养基的5.56U/mL增至36.76U/mL,比基础培养基的酶活提高了661%,实现了提高β-D-葡萄糖苷酶酶活的目的。4.利用高效液相色谱法对转化结果进行定量检测,最终建立色谱条件:色谱柱Pgrandsil STC C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相乙腈(A):水(B),梯度洗脱;柱温30℃;检测波长203nm;流速1.0mL/min;进样量5μL。经测定,5种菌株对人参皂苷均有转化作用,可将皂苷Rg_1转化为Rh_1;皂苷Rb_1转化为Rd;皂苷Rd转化为Rg_3。5.对5株具有转化能力的菌株进行分子生物学、形态学鉴定,鉴定结果为:菌株ZZ0501.sp为文森虫草(Cordyceps fumosorosea):菌株SM0501.sp为玫烟色拟青霉(Isaria fumosorosea);菌株QT0501.sp为玫烟色拟青霉(Isaria fumosorosea);菌株YP0501.sp为粉棒束孢(Isaria farinosa);菌株Y30501.sp为蛹虫草拟青霉(Cordyceps militaris)。
【图文】：

1.1.1 人参皂苷的结构及分类人参皂苷有糖苷和苷元线组成的糖苷类化合物，根据化学结构的差异可分玛烷型(图 1-1)、五环三萜齐墩果酸型(图 1-2)、奥克梯隆型（图 1-3）。图 1-1 达玛烷型人参皂苷原人参二醇型皂苷 20(S)-PPD原人参三醇型皂苷 20(S)-PPTFig.1-1 Dammarane type20(S)-PPD Protopanaxadiol saponins 20(S)-PPT Protopanaxtrol saposaponins

1.1.1 人参皂苷的结构及分类人参皂苷有糖苷和苷元线组成的糖苷类化合物，根据化学结构的差异可分玛烷型(图 1-1)、五环三萜齐墩果酸型(图 1-2)、奥克梯隆型（图 1-3）。图 1-1 达玛烷型人参皂苷原人参二醇型皂苷 20(S)-PPD原人参三醇型皂苷 20(S)-PPTFig.1-1 Dammarane type20(S)-PPD Protopanaxadiol saponins 20(S)-PPT Protopanaxtrol saposaponins
【学位授予单位】：吉林化工学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.72;TQ920.6

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本文编号：2699213