亲水性人参皂苷的提取分离及分析方法研究

发布时间：2020-06-06 06:13

【摘要】：人参(Panax ginseng C.A.Mey.)是五加科(Araliaceae)人参属(Panax)植物,俗称“百草之王”,能安神止悸,明目益智。人参皂苷是人参的主要活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保护心脑血管等药理作用。截止目前,国内外学者已经从人参属植物中发现了一百多种人参皂苷类化合物,其中大部分属于疏水性化合物,仅有小部分是亲水性化合物。由于亲水性人参皂苷分离难度较大,因此尽管亲水性人参皂苷在人参属植物中含量较高,但至今为止相关的研究报道也远远少于疏水性人参皂苷。为了明确亲水性人参皂苷在人参属植物中的分布,探讨亲水性人参皂苷与人参药理作用的关联性,开发这些亲水性人参皂苷的医药用途,本文对亲水性人参皂苷类化学成分进行了提取、分离、结构鉴定与分析方法的研究。本文首先对人参中亲水性人参皂苷进行了提取、分离。从70%甲醇提取物中共分得8个单体化合物,利用NMR、MS、IR等波谱学手段鉴定了其中7个单体的化学结构。其中2个为新化合物,1个为首分化合物,4个为已知化合物。新化合物分别为3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-达玛-23-烯-3β,12β,20S,25-四醇和3-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖基}-20-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-达玛-24-烯-3β,12β,20S-三醇;首次从人参中分离得到的化合物为竹节参皂苷VI;已知化合物分别为人参皂苷Ro、Ra_1、Ra_2和Ra_3。接着本文建立了人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1和Rc的高效液相色谱含量测定方法并进行了方法学考察。首先,参考药典条件,考察了以乙腈为流动相时,C-18色谱柱对上述人参皂苷的分离效果。结果发现,无论怎样调节流动相的比例,C-18色谱柱都不能将人参皂苷Ra_1和Rc分开,也不能将人参皂苷Ra_3和Rb_1分开,而酰胺色谱柱则可以将这四个成分完全分离开来。因此,本文建立了利用酰胺色谱柱同时测定人参中人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc含量的新的HPLC测定方法。实验结果表明,人参皂苷Ra_1在0.4~19.7μg、人参皂苷Ra_2在0.2~9.9μg、人参皂苷Ra_3在0.4~19.6μg、人参皂苷Rb_1在0.4~69.4μg、人参皂苷Rc在0.4~69.6μg之间峰面积y(S_均)和进样量x(m)的线性关系良好。方法的精密度、重复性、稳定性、加样回收率的RSD值均小于2%,说明方法精密度好,准确度高。利用此方法测定了三种人参属植物人参、三七、西洋参中人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc的含量。结果表明,人参中人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc的含量分别为0.107%、0.068%、0.048%、0.428%和0.422%;三七中人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc的含量分别为0.008%、0.004%、0.027%、0.875%和0.010%;西洋参中人参皂苷Rb_1、Rc的含量分别为0.630%和0.066%,未检测到人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3。上述研究结果表明,采用药典方法测定人参中人参皂苷Rb_1、Rc的含量,其结果有可能偏高。因此本文利用酰胺色谱柱和C-18色谱柱两种不同的色谱柱测定了人参中人参皂苷Rb_1、Rc的含量,并对测定结果进行了对比分析。结果表明,C-18色谱柱测得的人参中人参皂苷Rb_1、Rc的含量均高于酰胺色谱柱测得的人参皂苷Rb_1、Rc的含量,证明使用药典方法测定人参中人参皂苷Rb_1、Rc的含量时,因为人参皂苷Rb_1和Ra_3色谱峰重叠,Rc和Ra_1色谱峰重叠,导致测定结果偏高。另外上述研究结果也表明,与C-18色谱柱相比,酰胺色谱柱可能更适合于亲水性人参皂苷的分离与含量测定。综上所述,本论文从人参中分离鉴定了4个已知化合物,2个新化合物,1个首分化合物,共7个亲水性人参皂苷单体,丰富了人参皂苷的种类和数量;建立了利用酰胺色谱柱同时测定人参中人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc含量的新的HPLC测定方法;发现了《中国药典》规定的人参、红参中人参皂苷Rb_1的含量测定方法可能会造成测定结果偏高。本文的研究结果为完善《中国药典》中人参属植物及其制剂中人参皂苷Rb_1的含量测定方法提供了新的科学依据,也为同时测定人参属植物中人参皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc五种亲水性成分提供了新的HPLC含量测定方法。
【图文】：

流程图,提取分离,结构鉴定,流程图

提取分离流程图

谱图,谱图,化合物,附图

化合物3的HR-MS谱图
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.72;TQ464

【参考文献】