蛋黄抗体在牙膏中的应用研究

发布时间：2020-06-10 15:42

【摘要】：龋病(Caries)是人类患有最普遍的的疾病之一,世界卫生组织已将其与癌症和心血管疾病并列为人类三大重点防治疾病,变形链球菌(Streptococcus mutans)是主要致龋细菌。本论文利用变形链球菌作为抗原,白油作为佐剂,被动性免疫母鸡,产生特异型抗龋齿蛋黄抗体(IgY),将其应用于牙膏中,研究牙膏中表面活性剂、保湿剂、增稠剂和摩擦剂对IgY活性及结构的影响,确定IgY生物活性牙膏最适配方。维持活性稳定是生产抗龋齿IgY牙膏的关键,因此本论文首先选取牙膏中常用表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)、月桂酰肌氨酸钠(LS-30)、椰油酰胺丙基甜菜碱(CAB)和十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12)来研究其对IgY活性的影响。ELISA结果显示SDS造成IgY活性丧失,LS-30次之;差示扫描量热法(DSC)分析表明,添加SDS和LS-30的IgY在加热前蛋白已发生变性,而添加CAB的IgY变性温度提高2.4℃,焓值略有提升,IgY的耐热性增强,因此选择CAB作为IgY牙膏中最适表面活性剂。活性和光谱学结果表明,IgY最适pH为6-8,因为CAB是两性离子型表面活性剂,在中性环境中表现出非离子特性,会降低其与IgY相互作用的能力,因此本文选取pH 7.0作为牙膏体系微环境。利用紫外及荧光光谱对比研究SDS和CAB分别对IgY结构的影响,SDS浓度≥0.001g/m L时,IgY中Trp、Tyr和Phe特征吸收峰均发生蓝移,并产生静态荧光淬灭,曲线拟合分析得出SDS与IgY结合形成不产荧光的复合物;SDS在IgY溶液中形成临界胶束浓度远大于CAB,说明有更多的SDS单体与IgY结合,疏水相互作用为结合的主要作用力;红外结果揭示与SDS相互作用的IgY,α-螺旋和β-折叠含量减少,二级结构遭到破坏。与CAB混合的IgY,未发生荧光淬灭,且四种二级结构基本没有发生改变。其次,本文研究牙膏中常用保湿剂对IgY活性及结构的影响。甘油和70%山梨醇对IgY活性影响最小,结合光谱学手段分析,聚乙二醇-400和600使IgY发生淬灭,浓度越高淬灭效果越明显,因此选取甘油和70%山梨醇作为牙膏中的保湿剂。生物活性牙膏不仅需要保留IgY的活性还必须具有良好流变学性能,因此本论文进一步研究不同增稠剂对IgY活性的影响,以及不同保湿剂和增稠剂复配体系的流变学性能。通过间接ELISA对IgY活性检测和质构及流变学研究得到,当黄原胶和瓜尔豆胶添加量均为0.5%,甘油和山梨醇添加量分别为25%和35%时,所得到胶体性能最佳。最后对选择配方成分进行膏体活性及流变学研究,探索不同摩擦剂(二氧化硅、碳酸钙和磷酸氢钙)对牙膏体系的影响,结合正置荧光显微镜表征牙膏表观结构,得到二氧化硅型牙膏结构分散比较均匀,且对IgY活性影响最小。最适配方的选择为IgY在牙膏中的应用提供理论研究基础,拓展了IgY在日用化工领域的应用范围。
【图文】：

结构示意图,预防疾病,绪论,广泛应用

1 绪论治疗或预防疾病等方面，将限制 IgY 的广泛应用[36,37]。但 IgY 具有一定的耐酸、耐碱的性能，在 pH 4-10 环境下比较稳定，在含水条件下 65℃可以保持活性。Larsson 等[38]将IgY 在室温储存 6 个月，，证明其活性并未降低；Makoto 等[37]发现，在 4℃环境下含有0.1% NaN3的 9 g/L NaCl 溶液中储存 IgY，活性丧失不足 5%。

示意图,蛋白质结合,表面活性剂,等温线

江南大学硕士学位论文互作用和可能存在的疏水相互作用特异性结合胀。Reynolds 等[67]发现表面活性剂的极性基团链越长，越容易与蛋白质发生特异性结合。非同性结合中的一种结合方式。Chayen 等[68]认到一定浓度后，诱导蛋白质分子肽链展开，表一阶段蛋白质容易发生去折叠。饱和结合（区，继续增大浓度，表面活性剂会形成游离胶束液中。Reynolds 等[69]研究证明 SDS 与球蛋白蛋白结合 1.4 g SDS。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：TQ658.41

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