丙半胱氨酸为母体的氨基化合物手性拆分质谱试剂的开发及效能评价

发布时间：2020-08-18 07:44

【摘要】：氨基酸大多都含有手性中心,氨基酸的两个手性对映异构体在人体内生物活性有时会有显著的差异,例如:患有癌症及幽门螺杆菌感染的患者胃液中D-丙氨酸(D-Ala)的水平显着升高。然而,因氨基酸的一对手性对映异构体结构上的高度相似性为氨基酸手性对映异构体的识别、检测和分离带来了巨大的挑战。在诸多手性拆分方法中,液相-质谱联用(LC-MS)法由于其高灵敏度和选择性已成为分析手性氨基酸对映异构体的有利工具。鉴于此,本研究欲开发合成可靶向识别氨基官能团的新型手性质谱衍生化试剂并利用超高效液相-质谱联用(UHPLC-MS)法建立高灵敏度、高选择性的分析方法。本研究着眼于带有手性中心和羧基官能团的丙半胱氨酸(OTZD)结构为母体,首先导入三苯基磷(TPPP)结构,合成了具有氨基官能团靶向识别能力的手性衍生化试剂TPPP-OTZD,该试剂具有正电荷,可以提高质谱检测灵敏度。接着为了使试剂拥有更稳定的特征碎片离子,引入分子量较小的苄基结构,合成了可以靶向识别氨基官能团、具有手性拆分能力的手性质谱试剂BC-OTZD。该试剂可在质谱中精准地检测到其稳定的特征离子碎片苯甲基(m/z 91)。基于LC-MS技术,利用10种手性氨基酸以0.1%的甲酸水溶液和0.1%的甲酸乙腈溶液为流动相,在柱温为40℃条件下,使用C18为色谱柱对BC-OTZD的手性拆分效能进行了评价。结果 10 种氨基酸(D,L-Ser,D,L-Ala,D,L-Cys,D,L-Thr,D,L-Tyr,D,L-Val,D,L-Phe,D,L-Leu,D,L-Ile,D,L-His)实现完全分离,分离度为1.86-7.84。此外,本研究对唾液中含量较高的5种氨基酸(D,L-Ala,D,L-Tyr,D,L-Val,D,L-Phe,D,L-Leu)进行方法学考察,结果表明5种氨基酸在0.25-50 pmol范围内线性关系良好(R20.9992);检测限(S/N=3)为0.01-0.50 pmol,日内、日间精密度范围分别为0.21-4.13%,0.10-6.17%;唾液添加平均回收率为86.00-102.13%。最后,通过采集6名健康志愿者(3男3女)唾液进行定量分析。结果表明在男女唾液中D,L-Tyr,D,L-Val,D,L-Phe,D,L-Leu,D-Ala的平均含量基本相等,而L-Ala的平均含量女性略高于男性,定量值分别是1.48 ±1.30 fmol/mL,2.83±1.44 fmol/mL。本研究开发了丙半胱氨酸为母体的氨基化合物手性质谱试剂TPPP-OTZD和BC-OTZD。本试剂具有良好的手性拆分能力,为氨基化合物手性拆分研究提供了有效的手性质谱试剂,为氨基手性代谢物的定量分析提供了新的分析方法。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.63;TQ421.38
【图文】：

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本文编号：2795944