孜然提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用及对B16黑色素瘤细胞内黑色素生成的影响

发布时间：2020-09-24 20:08

　　孜然(Cuminum cyminum L.),属于一年或两年生的伞形科孜然芹属植物,原产于地中海地区,在中国主要分布于新疆。孜然含有多种活性成分,因其独特的食用和药用价值,在食品、医药等方面都有较好的应用价值。目前,在化妆品行业追寻绿色、天然、安全、稳定的美白剂已经成为一种潮流,因此天然的植物资源成为美白剂的较好来源之一。本文以孜然为原料,优化了孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的提取工艺,测定了孜然提取物中主要活性成分的含量,研究了孜然提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用及对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的影响,并考察了孜然提取物不同极性部位抗氧化活性及对酪氨酸酶活性的抑制效果,以期为孜然作为天然的美白材料应用于化妆品行业提供理论依据。主要研究结果如下:1.从乙醇、丙酮和水三种溶剂中筛选得到乙醇是孜然抑制酪氨酸酶活性成分的最佳提取溶剂。在单因素实验结果的基础上结合响应面设计,优化得到孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的最佳提取工艺参数:乙醇体积分数71%,液料比16:1(m L/g),提取时间2.2h,提取温度83℃,此优化条件下得到的孜然提取物对酪氨酸酶活性抑制率达(42.61±0.56)%,与预测值接近。2.采用Folin-Ciocalteu比色法测定多酚含量,Na NO_2-Al(NO_3)_3-Na OH比色法测定黄酮含量,香草醛比色法测定皂苷含量,苯酚-硫酸比色法测定多糖含量,结果表明孜然提取物中多酚、黄酮、皂苷、多糖的含量分别为(1.35±0.03)%、(4.40±0.29)%、(0.76±0.04)%、(4.89±0.28)%。3.孜然提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究结果表明,孜然提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性都具有明显的抑制效果,均呈浓度依赖关系,IC_(50)分别为1.027mg/m L和0.977mg/m L;孜然提取物能延长酪氨酸酶催化氧化L-酪氨酸的迟滞时间,迟滞时间与孜然提取物浓度呈正相关;孜然提取物抑制酪氨酸酶二酚酶活性的动力学研究结果表明,其抑制类型属于可逆混合型,抑制常数K_I为0.62mg/m L。4.孜然提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素合成影响的研究结果表明,孜然提取物作用于B16黑色素瘤细胞后,不影响B16黑色素瘤细胞的正常生长,对细胞活力的影响不显著,对细胞基本没有毒性;孜然提取物对B16黑色素瘤细胞内黑色素生成和酪氨酸酶活性均有显著的抑制作用,且均呈时间和浓度依赖关系。5.孜然提取物不同极性部位均有抑制酪氨酸酶活性与清除DPPH、羟自由基和超氧阴离子自由基的活性,且抑制酪氨酸酶活性与抗氧化活性从强到弱的顺序都为:乙酸乙酯部位正丁醇部位石油醚部位水部位。另外,孜然提取物不同极性部位抑制酪氨酸酶活性与抗氧化活性之间具有较强的正相关性,其中乙酸乙酯部位抑制酪氨酸酶活性与抗氧化活性均最强,表明孜然提取物中抑制酪氨酸酶活性与具有抗氧化活性的成分都主要集中在乙酸乙酯部位。上述试验证明孜然提取物能显著抑制酪氨酸酶活性及黑色素细胞内黑色素的合成,并具有较强的抗氧化活性,为孜然在美白化妆品中的应用提供了科学依据。
【学位单位】：兰州理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：TQ658
【部分图文】：

等高线图,响应面,等高线,提取温度

中心投影点越靠近椭圆中心，表示两因素交互作用越显著，且该因素对响应值的影响越大[65,66]。图 2.8 液料比和提取时间对酪氨酸酶抑制率影响的响应面曲线及等高线Fig. 2.8 Response surface curves and contour lines of the influence of liquid materialratio and extraction time on tyrosinase inhibition rate

等高线图,响应面,提取温度,等高线

Fig. 2.8 Response surface curves and contour lines of the influence of liquid materialratio and extraction time on tyrosinase inhibition rate图 2.9 乙醇体积分数和提取温度对酪氨酸酶抑制率影响的响应面曲线及等高线Fig. 2.9 Response surface curves and contour lines of the influence of ethanol concentrationand extraction temperature on tyrosinase inhibition rate

孜然,提取物

图 5.1 孜然提取物对细胞生长的影响Fig. 5.1 The effect of cumin extract on cell growth注：A、B、C、D 分别为 B16 黑色素瘤细胞经受试样品作用 24h 后，对照组、0.5mg/mL样品、1.0mg/mL 样品、1.0mg/mL 熊果苷作用的细胞形态图；E、F、G、H 分别为细胞经受试样品作用 72h 后，对照组、0.5mg/mL 样品、1.0mg/mL 样品、1.0mg/mL 熊果苷作用的细胞形态图。5.3.2 孜然提取物对 B16 黑色素瘤细胞增殖的影响如表 5.1 所示，孜然提取物及熊果苷对小鼠 B16 黑色素瘤细胞生长均有一定的抑制作用。孜然提取物对 B16 黑色素瘤细胞活力的抑制效果较弱，当孜然提取物浓度在 0.01~1.00mg/mL 范围内，细胞培养 24~72h 后，其对细胞活力均没有显著影响。当孜然提取物浓度为 0.01mg/mL 时，细胞存活率较高，随着孜然提取物浓度增大和细胞培养时间延长，其对细胞活力的影响均不显著（P > 0.05），尤其是当孜然提取物浓度为 1.00mg/mL，细胞培养 72h 时，细胞活力仍能达到 85.32%，E F G H

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