难溶性化合物的成盐及其与植物病毒关键酶靶标相互作用研究

发布时间：2020-11-18 19:19

　　 南方水稻黑条矮缩病毒S9-1被预测能编码病毒基质蛋白。病毒基质蛋白是病毒复制增殖的关键。因此我们研究抗病毒病活性小分子与SRBSDV P9-1的相互作用及结合方式,可以为新型高效的抗病毒药物的研制打下一定基础。本研究以原核表达方式获取南方水稻黑条矮缩病毒(South rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)P9-1为靶标蛋白,通过微量热泳动法、等温滴定量热法技术对33个抗病毒活性小分子进行初筛,针对作用MST、ITC结果差异较大的化合物进行成盐,并采用计算机分子对接计算出抗病毒活性小分子与SRBSDV P9-1的结合位点,通过定点突变PCR法对野生型SRBSDV P9-1质粒进行突变,利用原核表达获取突变型的SRBSDV P9-1,最终通过微量热泳动法、等温滴定量热法来验证药物与蛋白的结合力。实验结果表明:利用定点突变PCR法成功获得突变质粒,通过三种方法的研究结果表明,将P9-1的精氨酸7、精氨酸110、精氨酸327位突变后,其与小分子X2、X7的结合力弱于野生型与X2、X7的结合力,实验所得结果与计算机模拟结果一致,说明SRBSDV P9-1的7、110、327位精氨酸是X2、X7的关键结合位点;并通过农杆菌介导法验证X2在活体上的作用。
【学位单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TQ460.1
【部分图文】：

图 1.1 RNAi 技术处理 dsP9-1 抑制病毒原质形成Fig.1.1 Technical treatment of dsP9-1 inhibits virus formation，Mao 等[15]用免疫荧光显微等技术发现 P5 与 P6、P6 与

SRBSDVP9-1功能

图 1.3 SRBSDV P9-1-P6 相互作用Fig.1.3 Interaction between SRBSDV P9-1 and SRBSDV P616 年，吴锦鸿等[18]通过克隆 SRBSDV 的 P9- 1 基因，利用 Gateway 相体及方法得到表达载体 pDEST17-P9-1。IPTG 诱导大量表达蛋白，免
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本文编号：2889102